[发明专利]通过连接至促性腺激素羧基端肽来增加多肽的流体动力学体积的方法

权利要求书

1.一种增加目标多肽或其片段的流体动力学尺寸或流体动力学体积的方法，所述方法包括：将1-10个绒毛膜促性腺激素羧基端肽(CTP)连接至所述多肽或其片段，其中将所述1-10个CTP连接至所述多肽或其片段导致每个连接的CTP使所述多肽或其片段的流体动力学尺寸或流体动力学体积增加约28-53kDa，由此增加所述多肽或其片段的流体动力学尺寸或流体动力学体积。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述1-10个CTP连接至所述多肽的N-端。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述1-10个CTP连接至所述多肽的C-端。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述1-10个CTP中的2个或更多个CTP连接至所述多肽的N-端且所述1-10个CTP中的2个或更多个CTP连接至所述多肽的C-端。

5.根据权利要求1所述的方法，其中一个CTP连接至所述多肽的N-端且两个CTP连接至所述多肽的C-端。

6.根据权利要求1所述的方法，其中两个CTP连接至所述多肽的N-端且两个CTP连接至所述多肽的C-端。

7.根据权利要求1-6中的任一项所述的方法，其中所述CTP或所述多个CTP被糖基化。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述糖基化是O-糖基化。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述O-糖基化是通过α-糖苷键连接至蛋白链中的丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)的GalNAc。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述O-糖基化是核心1糖基化、O-岩藻糖基化、O-甘露糖基化或O-糖基化。

11.根据权利要求8-10中的任一项所述的方法，其中所述O-糖基化之后添加1-60个半乳糖分子。

12.根据权利要求8-11中的任一项所述的方法，其中所述O-糖基化之后添加1-120个唾液酸分子。

13.根据权利要求1-12中的任一项所述的方法，其中连接一个糖基化的CTP给所述多肽或其片段贡献约28.0至约53.0kDa。

14.根据权利要求1-6中的任一项所述的方法，其中所述CTP是未糖基化的。

15.根据权利要求1-14中的任一项所述的方法，其中所述多肽或其片段是促红细胞生成素(EPO)、人生长激素(hGH)、载脂蛋白-A1(APO-A1)、凝血因子或胃泌酸调节素(OXM)。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述凝血因子是因子IX(FIX)或因子VIIa(FVIIa)。

17.根据权利要求1-16中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学体积增加所述蛋白在生物样品中的保留时间。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述生物样品是血液、脑脊液(CSF)、淋巴液或血清。

19.根据权利要求1-18中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学体积增加所述蛋白的生物利用度。

20.根据权利要求1-19中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学体积增加所述蛋白的生物活性。

21.根据权利要求1-20中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学体积降低所述多肽或其片段的施用频率。

22.根据权利要求1-21中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学体积延长所述多肽或其片段的曲线下面积(AUC)。

23.根据权利要求1-22中的任一项所述的方法，其中所述1-10个CTP中的至少一个的氨基酸序列选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2。

24.根据权利要求1-23中的任一项所述的方法，其中所述1-10个CTP中的至少一个被截短。

25.根据权利要求1-24中的任一项所述的方法，其中所述1-10个CTP中的至少一个经由接头连接至所述多肽。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述接头是肽键。