[发明专利]靶向VEGFR-2和DLL4的双靶向抗体及包含它的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种新形式的双靶向抗体，其中DLL4的拮抗剂结合到靶向VEGFR-2的抗体的末端以额外靶向人DLL4，编码该抗体的DNA，包括它的重组表达载体，转化了该重组表达载体的宿主细胞，使用该宿主细胞生产双靶向抗体的方法，包括该双靶向抗体的药物组合物，以及测量该双靶向抗体的DLL4拮抗剂功效的方法。

背景技术

血管生成是内皮细胞通过生长、分裂、迁移等从现有的血管生成新血管的机制，其在正常生长过程中起重要作用包括伤口愈合或女性月经周期(Risau,Nature,386:671,1997)，而且，已知异常过度血管在疾病，如肿瘤生长和转移，年龄相关性黄斑变性(ARMD)，糖尿病性视网膜病，银屑病，类风湿性关节炎，慢性炎症中至关重要的作用(Carmeliet and Jain,Nature,407:249,2000)。

假设肿瘤生长和转移是血管生成依赖性的，因此，Dr.J.Folkman在1971年提出了关注于抗血管生成的治疗可能是用于治疗实体瘤的新治疗剂。此后，对于涉及抑制过多的血管生成机制的技术的研究吸引了众多研究者的关注(Ferrara and Kerbel,Nature,435:967,2005)。血管生成的进展方面是通过血管生成诱导剂和血管生成抑制剂的综合平衡来确定的，并且由复杂的多步骤顺序过程影响进展。详细地说，由肿瘤或受伤组织分泌的各种血管生成诱导剂(包括血管内皮生长因子(VEGF))被结合到相应的现有外周血管内皮细胞的相应受体以活化血管内皮细胞，从而增加血管内皮细胞的通透性，以及分泌蛋白酶如基质金属蛋白酶(MMP)，其分解基底膜和细胞外基质周围的血管内皮细胞，使得血管内皮细胞从现有的毛细血管逸出和朝向分泌血管生成诱导剂的组织迁移/增生。迁移和增殖的血管内皮细胞形成血管内管结构，最后，引入作为血管内皮细胞的结构支撑的周细胞以实现稳定且成熟的血管形成。

如上所述，已发现VEGF和结合至VEGF的VEGF受体(VEGFR)的信号途径受抑制，最终抑制血管生成，从而获得对各种疾病的治疗效果，如年龄相关的黄斑变性，糖尿病性视网膜病，牛皮癣，类风湿关节炎和慢性炎症，包括肿瘤生长和转移，因此，一直在进行能够抑制VEGF活性的各种药物的开发。

具体地，在1989年由来自Genentech的N.Ferrara博士组通过蛋白质分离、纯化和cDNA克隆形成VEGF(Leung et al.,Science,246:1306,1989)。迄今已知也被称作VEGF-A的VEGF具有四种同种型(VEGF121、VEGF165、VEGF189和VEGF206)，并且据报道，在这四种同种型中，VEGF 165在除了胎盘外的所有人体组织中是最丰富的(Tisher et al.,J.Biol.Chem.,266:11947,1991)。已知VEGF以显著高的亲和力结合受体VEGFR-1和VEGFR-2/KDR；然而，VEGF的信号转导主要通过VEGFR-2转移以诱导与血管生成相关的机制，例如血管内皮细胞的增殖、迁移等。由于上述原因，VEGF和VEGFR-2成为用于抑制VEGF诱导的血管生成机制的主要靶标，并且若干论文是针对于VEGF和VEGFR-2(Ellis and Hicklin,Nature Rev.Cancer,8:579,2008；Youssoufian et al.,Clin.Cancer Res.,13:5544s,2007)。

例如，阿瓦斯汀(贝伐单抗，Genentech)是一种靶向VEGF-A的人源化抗体(Ferrara et al.,Biochem.Biophy.Res.Comm.,333:328,2005)，分别在2004年获得美国FDA批准用于转移性结肠癌的治疗，在2006年批准用于非小细胞肺癌，和在2008年批准用于Her-2阴性转移性乳腺癌，并且被批准用于治疗多形性成胶质细胞瘤(GBM)和肾癌。目前，对各种实体瘤的临床试验正在进行中，以扩大适应症。此外，同一家公司开发的Lucentis，是通过从阿瓦斯汀仅切割Fab片段所制备的抗体(Eter et al,Biodrgus,20:167,2006)，在为了抑制作为老年性黄斑变性的主要样态的黄斑周围的过度血管生成而被注入视网膜时，Lucentis具有良好透气性，它作为治疗剂用于湿性年龄相关的黄斑变性(湿ARMD)，已于2006年获得美国FDA批准。