[发明专利]用荧光监测温度

权利要求书

1.测量样本温度的方法，所述方法包括：

提供包含温度敏感性试剂的样本，所述温度敏感性试剂响应于刺激而发射光信号；

其中，所述温度敏感性试剂发射的光信号的量以已知的方式作为温度的函数而变化；

测量所述温度敏感性试剂发射的光信号的量；以及

确定所述样本的温度，所述样本的温度作为由所述温度敏感性试剂发射的光信号的函数。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述温度敏感性试剂包括荧光染料，并且其中，所述发射的光信号包括荧光。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述荧光染料包括磺酰罗丹明B。

4.根据权利要求1所述的方法，进一步包括用刺激刺激所述温度敏感性试剂，以引起所述光信号。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述刺激包括通过暴露于电磁辐射的激发。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本包括水溶液。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本包括悬浮液。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本包括PCR混合物。

9.根据权利要求8所述的方法，进一步包括在PCR循环过程中的一个或多个时间点测量由所述样本发射的光。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本进一步包括产生第二光信号的第二试剂，其中，所述第二光信号表示所述样本中存在的核酸的量。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，通过所述温度敏感性试剂发射的光信号的函数确定的样本的温度与通过直接接触包含所述温度敏感性试剂的样本而测量的温度之间的差异小于或等于1摄氏度。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，由所述温度敏感性试剂发射的光信号的量基本不依赖于所述样本中存在的核酸的量。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述温度敏感性试剂不是dsDNA结合染料，所述温度敏感性试剂没有结合核酸，并且所述温度敏感性试剂的光信号不受dsDNA变性的影响。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，

所述样本进一步包括核酸的两条链以及产生显示存在的双链核酸的量的信号的试剂，

所述确定步骤在熔解所述核酸以及测量显示存在的双链核酸的量的信号的同时发生，并且

进一步包括产生熔解曲线的步骤，所述熔解曲线基于由所述光信号确定的温度而调整。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，使用下面的公式产生所述熔解曲线：

T=1ln(IIref)C+(1Tref)]]>

其中，I是所述温度敏感性试剂在温度T时所测量的荧光强度，I_ref是在参考温度T_ref的荧光强度，并且C是等于的校准常数。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述熔解曲线显示为导数熔解图。

17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述确定步骤包括产生所述光信号与通常对温度不敏感的样本的信号之比。