[发明专利]一种纯化治疗性蛋白质的方法

权利要求书

1.一种减少包含纤维蛋白原的溶液中至少一种选自纤维蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶水平的方法，该方法包含：

(i)将包含纤维蛋白原的原料应用到在6.5至8.5的pH平衡的疏水电荷诱导色谱树脂，其中所述疏水电荷诱导色谱树脂包含选自巯基乙基吡啶、正己胺和苯丙胺的配基，并且其中一旦应用到所述树脂，所述蛋白酶结合至所述树脂上，而所述纤维蛋白原在未结合的流经级分中通过所述树脂；和

(ii)回收通过所述树脂的包含纤维蛋白原的溶液；

其中所述回收的溶液中的所述至少一种选自纤维蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶的浓度相比于原料减少了至少50％。

2.一种减少包含纤维蛋白原的溶液中至少一种选自纤维蛋白溶酶原和t-PA的蛋白酶水平的方法，该方法包含：

(i)将包含纤维蛋白原的原料应用到在6.5至8.5的pH平衡的第一疏水电荷诱导色谱树脂；

(ⅱ)回收通过所述第一疏水电荷诱导色谱树脂的包含纤维蛋白原的溶液；

(ⅲ)将在步骤(ii)中回收的溶液应用到在6.5至8.5的pH平衡的第二疏水电荷诱导色谱树脂；和

(iv)回收通过所述第二疏水电荷诱导色谱树脂的包含纤维蛋白原的溶液；

其中所述疏水电荷诱导色谱树脂包含选自巯基乙基吡啶、正己胺和苯丙胺的配基，并且其中一旦分别将所述纤维蛋白原原料和溶液应用到所述第一和第二树脂，所述蛋白酶结合至所述第一和第二树脂上，而所述纤维蛋白原在未结合的流经级分中通过所述第一和第二树脂，和在步骤(iv)回收的溶液中蛋白酶的浓度相比于原料减少了至少50％。

3.权利要求2的方法，其中第一和第二疏水电荷诱导色谱树脂是相同的。

4.权利要求1的方法，进一步包含使在步骤(ii)中回收的包含纤维蛋白原的溶液通过阴离子交换色谱树脂。

5.权利要求2的方法，进一步包括使在步骤(ii)和/或步骤(iv)中回收的包含纤维蛋白原的溶液通过阴离子交换色谱树脂。

6.权利要求1的方法，进一步包含在步骤(ⅰ)之前使所述包含纤维蛋白原的原料通过阴离子交换色谱树脂。

7.权利要求4的方法，其中所述阴离子交换树脂是强阴离子交换树脂。

8.权利要求4的方法，其中在170mM至230mM NaCl存在下，使所述包含纤维蛋白原的溶液通过阴离子交换色谱树脂。

9.权利要求4的方法，其中所述纤维蛋白原是用包含从150mM至190mM NaCl的洗脱缓冲液从所述阴离子交换色谱树脂上洗脱的。

10.权利要求7的方法，其中所述纤维蛋白原是用包含1-3％w/v浓度游离氨基酸的洗脱缓冲液从所述阴离子交换色谱树脂上洗脱的。

11.权利要求10的方法，其中所述游离氨基酸是精氨酸。

12.权利要求1的方法，其中该包含纤维蛋白原的原料在步骤(ⅰ)之前进行病毒灭活步骤。

13.权利要求1的方法，其中步骤(ii)中从疏水电荷诱导色谱树脂回收的包含纤维蛋白原的溶液进行病毒灭活步骤。

14.权利要求4的方法，其中所述包含纤维蛋白原的原料或溶液在通过阴离子交换色谱树脂之前进行病毒灭活步骤。

15.权利要求12的方法，其中所述病毒灭活步骤包含巴氏灭菌法或用有机溶剂和清洁剂处理。

16.权利要求1的方法，其中该包含纤维蛋白原的原料是溶解的血浆冷沉淀物。