[发明专利]瘿蜂防治剂

说明书

序列表

本申请包含以ASCII格式通过EFS-Web提交的序列表，在此将其全部内容引入以作参考。2013年9月27日创建的所述ASCII副本命名为30407-0006WO1_SL.txt，其大小为46,878字节。

技术领域

本发明涉及昆虫物种中双链RNA(dsRNA)介导的基因沉默领域。

背景技术

在南北半球均发生了桉树的瘿蜂(gall wasp)侵扰，并且对中国、澳大利亚、以色列和巴西的商业桉树种植造成威胁。防治桉树感染瘿蜂的努力包括尝试分离天然抗性植物和天然捕食者。这些努力已遇到了限制或并未成功。瘿蜂产生的瘿瘤(gall)的保护性环境使化学杀虫剂防治瘿蜂产生困难。

即使可行，化学杀虫剂防治也有劣势。化学杀虫剂潜在地对环境不利，不是选择性的，且潜在地对非目标作物和动物群有害。化学杀虫剂存留于环境中并通常代谢缓慢，或根本不代谢。化学杀虫剂在食物链中、特别是在较高等的捕食者物种内积累，它们可充当诱变剂和/或致癌物以引起不可逆且有害的遗传修饰。此外，由于相同的杀虫剂或具有相同作用模式的杀虫剂的重复使用，作物害虫可发展出对化学杀虫剂的抗性。

RNA干扰或“RNAi”是由与要下调的靶基因区域序列互补的双链RNA(dsRNA)引发的序列特异性基因表达下调的过程(也称作“基因沉默”或“RNA介导的基因沉默”)。多细胞生物体中借助RNA干扰(RNAi)手段的靶基因下调已成为完善建立的技术。美国专利申请公布US 2009/0285784 A1和US 2009/0298787涉及dsRNA作为昆虫防治剂，并在此将其各自的全部内容引入于此以作参考。美国专利6,506,559号、美国专利申请公布2003/00150017 A1、国际公布WO 00/01846、WO 01/37654、WO 2005/019408、WO 2005/049841、WO 05/047300涉及RNAi保护植物抵抗昆虫的用途。在此将前述专利和公布的申请的全部内容分别引入于此以作参考。

另外的瘿蜂防治剂及其使用方法公开于2012年3月30日提交的国际公布PCT/US2012/031413，在此将其全部内容引入以作参考。

发明内容

本发明部分地基于本发明人对来自桉树入侵物种瘿蜂害虫：桉树枝瘿姬小蜂(Leptocybe invasa)(Li)和桉干瘿姬小蜂(Ophelimus maskelli)(Om)的基因的测序。在某些方面，本发明由此提供Li和Om的核酸、其衍生物以及此类核酸和衍生物作为瘿蜂防治剂的用途。

在某些方面本发明提供在高严格杂交条件(high stringency hybridization condition)下与SEQ ID NO:1-54和70-74中所列出的序列及其互补序列选择性杂交的分离的核酸。

在某些方面本发明提供与SEQ ID NO:1-54和70-74中所列出的序列及其互补序列的同一性(identical)为90-99.99％的分离的核酸。

在某些方面，本发明提供包括SEQ ID NO:1-54和70-74中所列出的至少17个邻接核苷酸(contiguous nucleotides)的分离的核酸。

在某些方面，本发明提供来自Li或Om的核酸，所述核酸包括如上所列出的与所述核酸的蜜蜂直向同源物(ortholog)的同一性为约80％以下的核酸。

在某些方面，本发明提供包括可操作地连接至表达调控序列(expression control sequence)的来自Li或Om的核酸或此类序列的反向互补体的载体。

在某些方面，本发明提供转化有和/或承载有包括可操作地连接至表达调控序列的来自Li或Om的核酸或此类序列的反向互补体的载体的宿主细胞。

在某些方面，本发明提供转化有和/或承载有包括可操作地连接至表达调控序列的来自Li或Om的核酸的载体的植物组织，例如叶组织和种子。

在某些方面，本发明提供抑制Li或Om核酸表达的分离的小抑制性核糖核酸(siRNA)分子。

在某些方面，本发明提供分离的双链核糖核酸(dsRNA)分子，所述分子包括与SEQ ID NO:1-54和70-74中的至少17个邻接核苷酸实质上同一的第一链核苷酸和与该第一链核苷酸实质上互补的第二链核苷酸。