[发明专利]用于生产发酵产物的方法

权利要求书

1.一种用于从含淀粉材料生产发酵产物的方法，该方法包括以下步骤：

i)在高于初始糊化温度的温度下，使用以下项液化该含淀粉材料：

-一种α-淀粉酶；

-任选地一种蛋白酶，该蛋白酶具有确定为在80℃/70℃下的相对活性的、超过20％的热稳定性值；以及

-任选地一种产碳水化合物源的酶；

ii)使用一种产碳水化合物源的酶进行糖化；

iii)使用一种发酵生物进行发酵；

其中在发酵过程中或同时糖化发酵过程中存在或添加一种纤维素分解组合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中液化过程中的pH是在高于5.0-6.5之间，例如高于5.0-6.0，例如高于5.0-5.5，例如在5.2-6.2之间，例如约5.2，例如约5.4，例如约5.6，例如约5.8。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该发酵产物是醇，优选乙醇，尤其是燃料乙醇、饮用乙醇和/或工业乙醇。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该α-淀粉酶来自芽胞杆菌属，例如嗜热脂肪芽孢杆菌菌株，特别是嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶的一种变体，例如在此的SEQ ID NO:1中所示的α-淀粉酶。

5.如权利要求4所述的方法，其中该嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶在I181+G182位置具有双缺失，并且任选地具有N193F取代、或R179+G180缺失(使用SEQ ID NO:1进行编号)。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该蛋白酶是来源于嗜热子囊菌属菌株的金属蛋白酶的一种变体，优选金黄色嗜热子囊菌的菌株，尤其是金黄色嗜热子囊菌CGMCC No. 0670。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该蛋白酶是来源于热球菌属菌株，优选激烈热球菌菌株。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中在液化步骤i)过程中存在的和/或添加的产碳水化合物源的酶是一种葡糖淀粉酶，该葡糖淀粉酶优选来源于青霉属菌株，尤其是在此的SEQ ID NO:9或14中披露的草酸青霉菌菌株。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，进一步地其中葡糖淀粉酶是在糖化和/或发酵过程中存在的和/或添加的。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在糖化和/或发酵过程中存在的和/或添加的该葡糖淀粉酶是真菌起源的，优选来自曲霉属的菌株，优选黑曲霉、泡盛曲霉、或米曲霉；或来自木霉属的菌株，优选里氏木霉；或来自篮状菌属的菌株，优选埃默森篮状菌；或来自密孔菌属的菌株；或来自粘褶菌属的菌株，例如篱边粘褶菌或密粘褶菌或来自黑层孔属的菌株。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，包括以下步骤：

i)在高于初始糊化温度的温度下，使用以下项液化该含淀粉材料：

-一种来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的α-淀粉酶；

-任选地一种蛋白酶，该蛋白酶具有确定为在80℃/70℃下的相对活性的、超过20％的热稳定性值，优选来源于激烈热球菌和/或金黄色嗜热子囊菌；以及

-一种草酸青霉菌葡糖淀粉酶；

ii)使用一种葡糖淀粉酶进行糖化；

iii)使用一种发酵生物进行发酵；

其中在发酵过程中或同时糖化发酵过程中存在或添加一种纤维素分解组合物。

12.如权利要求1至11所述的方法，其中该纤维素分解组合物来源于木霉属的菌株，特别是里氏木霉，或来源于腐质霉属的菌株，特别是特异腐质霉，或来源于金孢子菌属的菌株，特别是卢克诺文思金孢子菌。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中该纤维素分解组合物是一种里氏木霉纤维素分解酶组合物，该里氏木霉纤维素分解酶组合物进一步包括披露于在此的SEQ ID NO:23中的、具有纤维素分解增强活性的埃默森青霉菌GH61A多肽、以及披露于在此的SEQ ID NO:22中的烟曲霉β-葡糖苷酶或其具有以下取代的变体：F100D、S283G、N456E、F512Y。