[发明专利]衣康酸和衣康酸甲酯生产

权利要求书

1.重组细胞，其能够产生4-甲基衣康酸酯或1-甲基衣康酸酯中的一种或多种。

2.根据权利要求1的重组细胞，其中一种或更多种编码多肽的核酸序列被过表达，所述多肽能够催化一种或更多种下述转化：

a.顺乌头酸向衣康酸；

b.衣康酸向4-甲基衣康酸酯；

c.衣康酸向1-甲基衣康酸酯；

d.顺乌头酸向反乌头酸；

e.反乌头酸向(E)-3-羧基-2-戊烯二酸5-甲酯；

f.反乌头酸向(E)-3-(甲氧羰基)戊-2-烯二酸酯；

g.(E)-3-羧基-2-戊烯二酸5-甲酯向4-甲基衣康酸酯；和

h.(E)-3-(甲氧羰基)戊-2-烯二酸酯向1-甲基衣康酸酯。

3.根据权利要求2的重组细胞，其能够产生1-甲基衣康酸酯，且其包含一种或更多种编码能够催化下述转化的多肽的核酸序列：

-a和c；或者

-d、f和h。

4.根据权利要求2或3的重组细胞，其能够产生4-甲基衣康酸酯，且其包含一种或更多种编码能够催化下述转化的多肽的核酸序列：

-a和b；或者

-d、e和g。

5.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其是酵母细胞。

6.重组酵母细胞，其能够产生衣康酸且其过表达：

-编码具有顺乌头酸脱羧酶活性的多肽的核酸；和

-一种或更多种编码单独地或共同地催化朝向乙酰CoA的反应的多肽的核酸。

7.根据权利要求6的重组酵母细胞，其中编码催化朝向乙酰CoA的反应的多肽的核酸是：

-编码共同地具有丙酮酸脱氢酶活性的多肽的核酸序列；

-一种或更多种核酸序列，其编码一种或更多种具有丙酮酸脱羧酶活性、乙醛脱氢酶活性和/或乙酰CoA合成酶活性的多肽；

-编码具有乙酰化乙醛脱氢酶活性的多肽的核酸序列；

-编码具有丙酮酸:NADP氧化还原酶活性的多肽的核酸序列；

-编码具有乙酸:CoA连接酶(ADP形成)活性的多肽的核酸；

-编码ATP:乙酸磷酸转移酶活性的多肽的核酸和编码具有乙酰CoA:Pi乙酰转移酶活性/磷酸乙酰转移酶活性的多肽的核酸。

8.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其过表达：

-编码催化柠檬酸向顺乌头酸转化的多肽的核酸；和/或

-编码具有柠檬酸合酶活性的多肽的核酸。

9.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其过表达：

-编码具有丙酮酸羧化酶的多肽的核酸；和/或

-编码具有PEP羧激酶活性的多肽的核酸；和/或

-编码具有PEP羧化酶的多肽的核酸。

10.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其过表达：

-编码线粒体膜柠檬酸转运体的核酸序列。

11.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其包含：

-编码衣康酸转运体、4-甲基衣康酸酯转运体或1-甲基衣康酸酯转运体的核酸序列。

12.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其包含遗传修饰，导致所述细胞比不具有所述遗传修饰的细胞中丙酮酸脱羧酶、醇脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶或琥珀酰-CoA连接酶的表达和/或活性降低。

13.根据前述权利要求中任一项的重组细胞，其是S.cerevisiae细胞。

14.重组细胞，任选地根据权利要求1-13中的任一项的重组细胞，其包含，例如过表达，催化下述反应的多肽：

细胞溶胶衣康酸转运至胞外衣康酸；

细胞溶胶顺乌头酸转化为衣康酸；

细胞溶胶柠檬酸转化为顺乌头酸；

细胞溶胶草酰乙酸和乙酰辅酶A转化为柠檬酸；

细胞溶胶乙醛、NAD和辅酶A转化为乙酰辅酶A和NADH；和

细胞溶胶丙酮酸和碳酸氢酯/盐转化为草酰乙酸。