[发明专利]重组细胞以及β-水芹烯的生产方法

权利要求书

1.一种具有β-水芹烯生产能力的重组细胞，其将选自编码牻牛儿基二磷酸合成酶的核酸及编码橙花基二磷酸合成酶的核酸中的至少1种核酸和编码β-水芹烯合成酶的核酸导入宿主细胞而成，且这些核酸在宿主细胞内表达。

2.如权利要求1所述的重组细胞，其中，宿主细胞不具有甲烷单加氧酶。

3.如权利要求2所述的重组细胞，其中，宿主细胞为大肠杆菌或酵母。

4.如权利要求1～3中任一项所述的重组细胞，其中，重组细胞的湿润菌体1g能够生产10mg以上的β-水芹烯。

5.如权利要求1～4中任一项所述的重组细胞，其中，编码牻牛儿基二磷酸合成酶的核酸对下述(a)、(b)或(c)的蛋白质进行编码，

(a)由序列号2所示的氨基酸序列构成的蛋白质、

(b)由在序列号2所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加了1～20个氨基酸而成的氨基酸序列构成，且具有牻牛儿基二磷酸合成酶活性的蛋白质、

(c)具有与序列号2所示的氨基酸序列显示60％以上的同源性的氨基酸序列，且具有牻牛儿基二磷酸合成酶活性的蛋白质。

6.如权利要求1～5中任一项所述的重组细胞，其中，编码橙花基二磷酸合成酶的核酸对下述(d)、(e)或(f)的蛋白质进行编码，

(d)由序列号4所示的氨基酸序列构成的蛋白质、

(e)由在序列号4所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加了1～20个氨基酸而成的氨基酸序列构成，且具有橙花基二磷酸合成酶活性的蛋白质、

(f)具有与序列号4所示的氨基酸序列显示60％以上的同源性的氨基酸序列，且具有橙花基二磷酸合成酶活性的蛋白质。

7.如权利要求1～6中任一项所述的重组细胞，其中，编码β-水芹烯合成酶的核酸对下述(g)、(h)或(i)的蛋白质进行编码，

(g)由序列号6或8所示的氨基酸序列构成的蛋白质、

(h)由在序列号6或8所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加有1～20个氨基酸而成的氨基酸序列构成，且具有β-水芹烯合成酶活性的蛋白质、

(i)具有与序列号6或8所示的氨基酸序列显示60％以上的同源性的氨基酸序列，且具有β-水芹烯合成酶活性的蛋白质。

8.如权利要求1～7中任一项所述的重组细胞，其还导入对在异戊烯基二磷酸的合成路径中发挥作用的至少1个酶进行编码的核酸，该核酸在宿主细胞内表达。

9.如权利要求8所述的重组细胞，其中，异戊烯基二磷酸的合成路径为甲羟戊酸路径。

10.如权利要求9所述的重组细胞，其中，所述甲羟戊酸路径为酵母或放线菌的甲羟戊酸路径。

11.一种β-水芹烯的生产方法，其包括：通过培养权利要求1～10中任一项所述的重组细胞来使该重组细胞生产β-水芹烯。

12.如权利要求11所述的β-水芹烯的生产方法，其包括：使重组细胞的湿润菌体1g生产10mg以上的β-水芹烯。

13.如权利要求11或12所述的β-水芹烯的生产方法，其包括：对释放到重组细胞的细胞外的β-水芹烯进行回收。

14.如权利要求11～13中任一项所述的β-水芹烯的生产方法，其包括：从重组细胞的培养体系的气相中回收β-水芹烯。