[发明专利]细胞培养基

说明书

本发明涉及包含酪氨酸和/或半胱氨酸的无机酯衍生物的细胞培养基。细胞培养基中酪氨酸的差溶解性和半胱氨酸的时常稳定性不足可以通过将酪氨酸和半胱氨酸替代为无机酯衍生物而克服，所述无机酯衍生物例如磷酸化衍生物。

技术领域

本发明涉及包含酪氨酸和/或半胱氨酸的无机酯衍生物的细胞培养基。通过用无机酯衍生物，例如磷酸化的衍生物，置换酪氨酸和半胱氨酸，可以克服在细胞培养基中酪氨酸溶解性差而半胱氨酸时常稳定性不足的问题。

背景技术

细胞培养基支持和维持细胞在人工环境中的生长。

取决于应被支持生长的生物体类型，细胞培养基包含多种成分——有时一百种以上的不同成分——的复杂混合物。

哺乳动物、昆虫或植物细胞繁殖所需的细胞培养基通常比支持细菌和酵母生长的培养基要复杂得多。

最先开发的细胞培养基由不确定成分组成，如血浆、血清、胚胎提取物、或其他未确定成分的生物提取物或蛋白胨。因而开发化学成分确定的培养基成为了一个重要的进步。化学成分确定的培养基常包括但不仅限于氨基酸、维生素、金属盐、抗氧化剂、螯合剂、生长因子、缓冲剂、激素和本领域技术人员已知的许多其他物质。

一些细胞培养基作为无菌水性液体提供。液体细胞培养基的缺点是其减少的保质期以及运输和储存困难。因此，目前许多细胞培养基以细磨干粉混合物提供。这些培养基出于在水和/或水溶液中溶解的目的而生产，并且被设计为在溶解状态下(常常与其它补充剂一起)为细胞供应实质的营养基质以便所述细胞可以生长和/或生产生物药。

大多数生物药生产平台基于补料分批细胞培养方案。目的通常在于，开发高滴度细胞培养方法以满足渐增的市场需求和降低制造成本。除使用高性能重组细胞系外，也需要改良细胞培养基和方法参数以实现最大的生产潜力。

在补料分批方法中，基础培养基支持初始生长和生产，补料培养基防止养分耗竭并维持生产阶段。选择培养基以适应在不同生产阶段的不同代谢需求。方法参数设置-包括进料策略和控制参数-定义合适细胞生长和蛋白生产的化学和物理环境。

补料培养基的优化是优化补料分批方法的主要方面。

大多数情况下补料培养基是高度浓缩的，以避免生物反应器的稀释。营养物的受控加入直接影响培养物的生长速率。

从干粉制备细胞培养基的一个限制因素是某些成分的溶解性差或稳定性差，特别是氨基酸L-酪氨酸和L-半胱氨酸的溶解性或稳定性差。对于L-酪氨酸，溶解性差是主要问题，而对于L-半胱氨酸，稳定性问题占主导地位。

因此找到提高L-酪氨酸和L-半胱氨酸的溶解性和/或稳定性的方法将是有利的。

发明概述

已经发现，L-酪氨酸和L-半胱氨酸的无机酯衍生物具有改进的溶解性和/或稳定性，可分别代替L-酪氨酸和L-半胱氨酸用于细胞培养基中而没有任何负面影响，并且有时甚至对细胞生长有积极的影响。

也已发现，这种无机酯衍生物特别适于制备补料溶液，其中所述补料溶液具有不超过pH8.5的pH、并具有高浓度的以适于作为细胞营养物的形式存在的酪氨酸和半胱氨酸。

因此，本发明涉及包含酪氨酸和/或半胱氨酸的至少一种无机酯衍生物的细胞培养基。

在一个优选的实施方案中，无机酯衍生物是硫酸酯衍生物或磷酸酯衍生物。

在一个优选的实施方案中，细胞培养基包含式I和/或II的成分中的一种或多种：

在一个优选的实施方案中，酪氨酸的无机酯衍生物是(S)-2-氨基-3-(4-膦酰基氧基-苯基)-丙酸或其盐。