[发明专利]针对胞壁肽的单克隆抗体

说明书

公开了分离的抗体或其抗原结合片段。所述抗体能够结合胞壁肽或胞壁肽的衍生物或类似物或盐。所述胞壁肽包含胞壁酸和选自丙氨酸、异谷酰胺、谷氨酸及其盐的氨基酸。还公开了产生所述抗体的方法、包含所述抗体的组合物、利用所述抗体进行治疗的方法、所述抗体的用途、检测胞壁肽的方法、检测胞壁肽的测定、抗细菌剂、杂交瘤和试剂盒。

相关申请的交叉引用

本申请要求2012年11月1日提交的新加坡专利申请第201208082-6号的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文用于所有目的。

发明领域

本发明通常涉及免疫学和传染病领域。具体而言，本发明涉及抗体。

发明背景

细菌感染无论是在医学领域还是在商业的非医学领域都是不受欢迎的。为了有效消除不想要的细菌生长，研究人员已经研究了细菌的基本构件，诸如细菌的细胞壁。细菌细胞壁的一种主要成分是肽聚糖，其亚单元被称为胞壁肽。由胞壁肽亚单元形成的肽聚糖在细胞生长和分裂过程中经历细胞壁重建所需的组装和拆卸循环。胞壁肽在拆卸过程中产生，并在细胞生长和分裂过程中再循环以构建新的肽聚糖。因此，胞壁肽在多种细菌的增殖过程中不断地释放。当细菌细胞被噬菌体、抗体和宿主吞噬细胞裂解时，也产生并释放胞壁肽。

多种胞壁肽是有效的信号传导分子，并且已被证明能强烈地影响人类宿主中的多个生理过程。与胞壁肽相关的生物活性包括佐剂性、Somnogenicity、致热原性和对纤毛上皮细胞的毒性。胞壁肽还与一系列人类疾病相关，诸如败血症、克罗恩病、风湿性关节炎、哮喘、过敏症、特应性病症、多发性硬化、百日咳和淋病。在胞壁酸残基和肽中不同氨基酸残基上携带不同侧链的不同类型的胞壁肽具有不同的活性。

胞壁肽通过结合特异性的肽聚糖识别蛋白(PGRPs)而影响人类生理机能。人具有四种PGRPs和两种细胞内肽聚糖传感元件---Nod1和Nod2，所述PGRPs能够直接结合革兰氏阳性和革兰氏阴性肽聚糖，所述Nod1和Nod2属于模式识别受体大家族，其识别保守的微生物相关的或病原体相关的分子模式。Nod2识别胞壁酰二肽N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷氨酰胺，而Nod1识别肽中的D-γ-谷氨酰基-mDAP基序。Nod1和Nod2通过激活转录因子NF-κB触发并调节宿主免疫应答，所述NF-κB依次开启促炎性细胞因子和趋化因子的产生以及其它防御基因的表达。Nod1、Nod2和NF-κB还参与多种人类疾病。

人微生物群含有10至100万亿种非致病性的细菌细胞，它们不断地产生和分泌大量的胞壁肽。这些分子的一部分能够在宿主的稳态中和多种病理生理条件下通过多种机制进入宿主循环系统。除了很多与上文所述的人类疾病已确立的联系外，强有力的证据正在快速累积，即由共生细菌所释放的胞壁肽在主要的人类系统如免疫系统、胃肠屏障和脑的发育、维持以及调节中起到关键作用。因此，人体内胞壁肽的水平和类型被认为对人类健康以及疾病倾向和病理生理至关重要。

考虑到胞壁肽在人类健康和疾病中十分重要，检测、定量、中和或隔离这些分子的技术预期在疾病预测、诊断和治疗中具有广泛应用。这样的技术还可以用于检测医疗设备、试剂、生物产品、食品和饮品的细菌污染。

针对胞壁肽的单克隆抗体是本领域内已知的。一种这样的抗体mAb2-4，属于IgG2a同种型，已被详细表征。然而，到目前为止，已知mAb2-4仅用于组织的免疫染色，以检测主要在炎症组织和巨噬细胞中肽聚糖的存在。还不了解该抗体能否用于通过诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)的测定检测溶液中的肽聚糖或胞壁肽。此外，发现mAb2-4对胞壁肽具有非常低的亲和力。使用mAb2-4的抑制测定表明，mAb2-4通过N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷酰胺结合肽聚糖的50％抑制仅在浓度大于1mg/ml时发生。此外，抗原决定簇的结构分析表明，mAb2-4抗体识别与二肽连接的N-乙酰胞壁酸。由于很多种细菌在胞壁酸残基中没有N-乙酰基，mAb2-4似乎是在识别细菌种类中具有较窄特异性的抗体。