[发明专利]目标粒子的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统等能够检测到来自溶液中的微小区域的光的光学系统而检测目标粒子的方法。

背景技术

随着近年来光学测量技术的发展，使用共聚焦显微镜的光学系统和能够进行光子计数(单光子检测)的超高灵敏度的光检测技术，能够检测·测定单光子或单分子荧光水平的微弱光。因此，提出了使用这样的微弱光的检测技术，进行生物分子等的分子间相互作用或者分子间的结合/解离反应的检测的各种装置或方法。特别是，荧光相关光谱分析(Fluorescence Correlation Spectroscopy：FCS)、荧光强度分布分析(Fluorescence-Intensity Distribution Analysis：FIDA)等使用了共聚焦显微镜的光学系统和光子计数技术的微小区域的荧光测定技术的方法，测定所需要的试样与以往相比较浓度极低且微量即可，每次测定所使用的量最多数十μL左右。由于每次测定中可重复进行数次的秒数量级时间的测定，所以测定时间也大幅地缩短。进而，作为FCS的方式之一有如下方法：分散于溶解有大量发光物质的溶液中的非发光粒子进入共焦体积内时检测到的光强度降低的体系中，计算出荧光强度的自相关函数的值并计算出非发光粒子在共焦体积内的平移扩散时间和滞留粒子数的平均值的方法(inverted-FCS(iFCS))(例如，参照专利文献1。)

最近，提出了使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统等能够检测到来自溶液中的微小区域的光的光学系统，一边在测定试样溶液内移动作为光的检测区域的微小区域的位置，一边逐个地检测在该微小区域内出入的发光粒子(通过荧光、磷光、化学发光、生物发光、光散射等发出光的粒子)的新颖方式的光分析技术(扫描分子计数法)(例如，参照专利文献2～4)。扫描分子计数法为如下技术：具体而言，使用共聚焦显微镜或多光子显微镜的光学系统，一边在测定试样溶液内移动前述光学系统的光检测区域的位置，一边检测由该光检测区域中的发光粒子发出的光，由此一个一个地逐个检测测定试样溶液中的发光粒子，能够取得关于发光粒子的计数、测定试样溶液中的发光粒子的浓度或数密度的信息。

扫描分子计数法的光检测机构自身与FIDA等光分析技术的情况相同，采取对来自共聚焦显微镜或多光子显微镜的光检测区域的光进行检测的构成，所以与FIDA同样地，测定试样溶液的量同样地可以是微量的(例如数十μL左右)，另外，测定时间也短。另一方面，扫描分子计数法与需要计算出荧光强度的波动等的统计学处理的FIDA等不同，不需要实行这样的统计学处理。因此，扫描分子计数法的光分析技术能够适用于粒子的数密度或浓度大幅地低于FIDA等光分析技术所需要的水平的测定试样溶液。即，利用扫描分子计数法检测被发光探针标记的测定试样溶液中的目标粒子(观测对象粒子)，即便在测定试样溶液中的目标粒子的浓度或数密度非常低的情况下，也能够检测并解析目标粒子的状态或特性(例如,参照专利文献5)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2010/119098号

专利文献2：国际公开第2011/108369号

专利文献3：国际公开第2011/108370号

专利文献4：国际公开第2011/108371号

专利文献5：国际公开第2012/014778号

发明内容

发明要解决的问题

逐个地检测发光的单一粒子的光的扫描分子计数法中，来自单一粒子的光是微弱的，所以容易受到漫射光、水的拉曼散射的影响。即，将表示由发光粒子发出的光的光强度值的增大识别为发光粒子的信号的分析手法的情况下，有时误将漫射光、水的拉曼散射产生的光识别为发光粒子的信号。另外，检测单一粒子的光的扫描分子计数法的情况下，作为观测对象的粒子(观测对象粒子)仅仅限于发光粒子。因此，想观测非发光性粒子的情况下，需要对于作为观测对象的粒子附加发光标记(荧光标记、磷光标记等)，但不一定总是能够对观测对象粒子赋予适当的发光标记。进而，观测对象粒子有时由于赋予发光标记而变性。

本发明目的在于提供抑制由漫射光、水的拉曼散射带来的影响并且不进行发光标记地利用扫描分子计数法检测测定试样溶液中的非发光性的目标粒子(检测对象的粒子)的方法。

用于解决问题的方案