[发明专利]CRZ1突变型真菌细胞

权利要求书

1.一种分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞，其缺乏功能性CRZ1多肽，并包含(i) 功能性ATT1多肽，(ii) 突变、破坏、截短、部分缺失或完全缺失的内源OCH1，和(iii) 编码异源多肽的异源多核苷酸；

其中内源CRZ1基因编码内源CRZ1多肽，其不同于包含SEQ ID NO: 3中所示的氨基酸序列的野生型CRZ1多肽之处在于所述内源CRZ1多肽包含选自下述的突变：

L33→终止；

Q214→终止；

L294→终止；

S298→终止；

E403→G；

F406→S；

F406→L；

C411→F；和

K469→N。

2.权利要求1的分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞：

(i) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞的一种或多种内源β-甘露糖基转移酶基因是突变、破坏、截短或者部分或完全缺失的；

(ii) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞包含编码α-1,2甘露糖苷酶的多核苷酸；

(iii) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞的一种或多种内源磷酸甘露糖基转移酶是突变、破坏、截短或者部分或完全缺失的；

(iv) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞包含单亚基寡糖基转移酶；

(v) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞的内源ALG3是突变、破坏、截短或者部分或完全缺失的；

(vi) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞包含编码内切甘露糖苷酶的多核苷酸；

(vii) 其中所述分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞包含编码双功能UDP-N-乙酰葡糖胺-2-差向异构酶/N-乙酰甘露糖胺激酶、N-乙酰神经氨酸-9-磷酸合酶、或CMP-唾液酸合酶的一种或多种多核苷酸；

(viii) 包含编码半乳糖基转移酶的多核苷酸；

(x) 包含编码核苷酸糖转运蛋白的多核苷酸；

(xi) 包含编码唾液酸转移酶的多核苷酸；

(xii) 包含编码乙酰氨基葡萄糖转移酶的多核苷酸；和/或

(xiii) 其中一种或多种内源蛋白酶是突变、破坏、截短或者部分或完全缺失的。

3.权利要求1或2的分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞，其中所述异源多肽是免疫球蛋白。

4.一种用于生产在生物过程发酵条件下具有增强的温度抗性和增加的稳健性的分离的巴斯德毕赤酵母细胞的方法，其包括将选自下述的突变引入所述巴斯德毕赤酵母细胞中的内源CRZ1：

L33→终止；

Q214→终止；

L294→终止；

S298→终止；

E403→G；

F406→S；

F406→L；

C411→F；和

K469→N。

5.一种分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞，其通过权利要求4的方法产生。

6.一种用于制备权利要求1-3中任一项的分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞的方法，其包括将异源多核苷酸引入细胞内，所述异源多核苷酸与内源CRZ1同源重组，并且部分或完全缺失所述内源CRZ1或者破坏所述内源CRZ1。

7.一种分离的巴斯德毕赤酵母宿主细胞，其通过权利要求6的方法产生。