[发明专利]特异性结合TM4SF5蛋白的新型单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及特异性结合跨膜4L六家族成员5(TM4SF5)蛋白的新型单克隆抗体，和更具体地涉及特异性结合人TM4SF5蛋白的单克隆抗体、编码该单克隆抗体的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体、其中引入该表达载体的转化体、制备该单克隆抗体的方法、包含该单克隆抗体的组合物、利用该单克隆抗体治疗癌症的方法、利用该单克隆抗体抑制癌症肝转移的方法、利用该单克隆抗体诊断癌症的方法、和包括该单克隆抗体的癌症诊断试剂盒。

背景技术

一般地，跨膜4超家族(TM4SF)蛋白是分子量为约25-50kDa、包括四个跨膜结构域、两个胞外环和两个短胞质尾区的一类疏水蛋白质，也被称为四跨膜超家族蛋白(tetraspanin或tetraspan)。TM4SF蛋白与细胞粘附分子如整合蛋白一起在细胞膜上形成复合物，从而建立庞大的四跨膜超家族蛋白富集的微型结构域(TERM)并贡献于不同的生物学功能，如细胞粘附、增殖、和迁移。

TM4SF5(跨膜4L六家族成员5或四跨膜L6超家族成员5)是四跨膜超家族蛋白的成员，并且具有这样的结构：包括穿过细胞膜的不溶性蛋白质的四个结构域、存在于胞外的两个环、存在于细胞质的一个环和两个尾。TM4SF5是肿瘤相关抗原L6(TM4SF1)的同系物，并且已知TM4SF5的mRNA在胰腺癌、胃癌、结直肠癌、软组织肉瘤等的细胞中被高度过表达。另外，已公开TM4SF5蛋白在COS7细胞中的人工表达可导致肌动蛋白重整和粘着斑翻转(focal adhesion turnover)，因此表明其涉及细胞迁移(Lee SA等，J Clin Invest 2008，118(4)：1354-66)。另外，TM4SF5蛋白与L6——癌症相关基因——具有高的氨基酸序列同源性，因此据说被怀疑是癌症相关基因，并且还已被报道与癌症发展和进程紧密相关。TM4SF5涉及细胞增殖——通过促进G1/S周期进程经过胞内p27Kip1表达和RhoA GTP酶活性(Kim H等，Biochim Biophys Acta 20101803(8)：975-82)，并且在转化生长因子-β1(TGF-β1)和表皮生长因子受体(EGFR)之间的信号传导途径中的相互通信——上皮-间质转化(EMT)涉及的主要因素——已知诱导TM4SF5的表达，从而引起EMT(Kang M等，Biochem J 2012443(3)：691-700)。

如上所述，随着作为新的癌症诊断的特异性蛋白质和抗癌靶的TM4SF5出现，研究已集中于以TM4SF为靶诊断癌症。另外，关于以TM4SF作为靶的癌症治疗，研究已集中于在不同领域抑制TM4SF5的生物学活性。具体地，已对可抑制TM4SF5活性的化合物进行了研究。例如，在查尔酮化合物中，磺胺-或磺酸基-取代的查尔酮衍生物已被报道抑制TM4SF5的生物学活性(韩国专利号10-0934706)。除抑制TM4SF5的生物学活性的化合物外，还已突出了研究特异性结合TM4SF5的单克隆抗体的重要性。具体地，关于临床研究，可用于通过特异性结合TM4SF5，从而抑制TM4SF5的生物学活性来预防和治疗癌症的单克隆抗体的研发需求升高。

公开内容

技术问题

发明人在尝试寻找可特异性结合人TM4SF5蛋白并有效抑制TM4SF5蛋白的生物学活性如癌转移的单克隆抗体时，研发了来自抗体库的特异性结合人TM4SF5的新型单克隆抗体，并确认该抗体可有效抑制TM4SF5的生物学活性，从而完成本发明。

技术方案

本发明的一个目的是提供特异性结合跨膜4L六家族成员5(TM4SF5)蛋白的单克隆抗体。

本发明的另一目的是提供制备该单克隆抗体的方法。

本发明的再一目的是提供编码该单克隆抗体的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体、和包括引入其中的表达载体的转化体。

本发明的再一目的是提供包含该单克隆抗体的组合物。

本发明的再一目的是提供包含该单克隆抗体的用于诊断癌症的试剂盒。

本发明的再一目的是提供利用该单克隆抗体治疗癌症的方法。

本发明的再一目的是提供抑制肝癌转移的方法，该方法包括给予该单克隆抗体至疑患肝癌的对象。

本发明的再一目的是提供诊断癌症的方法，该方法包括利用该单克隆抗体，通过抗原-抗体反应，检测分离自疑患癌症的对象的生物学样品中的TM4SF5蛋白。

有利效果