[发明专利]在体内具有抗肿瘤活性的抗人Dlk-1抗体

说明书

技术领域

本发明涉及具有抗肿瘤活性的抗人Dlk-1抗体，尤其是在体内具有抗肿瘤活性的抗人Dlk-1抗体。另外本发明涉及产生该抗体的杂交瘤和该抗体的用途。

背景技术

人Dlk-1(delta-like 1homolog(Drosophila)；δ样1同源物(果蝇)；以下也称为“hDlk-1”)是全长为383个氨基酸残基的单次跨膜型的1型膜蛋白，其在细胞外区域具有6个EGF样基序。其细胞外区域与Notch/Delta/Serrate家族显示出同源性。hDlk-1基因作为在GRP(gastrin releasing peptide，胃泌素释放肽)应答性的肺小细胞癌来源的细胞株中表达的分子(非专利文献1)或作为抑制前脂肪细胞分化的因子被克隆(非专利文献2)。hDlk-1由于与作为细胞分化控制因子的Notch受体的配体δ的氨基酸序列具有同源性，通常用DLK1这样的基因标识来命名，此外，虽然具有Pref-1(非专利文献2)、pG2(非专利文献3)、SCP-1(非专利文献4)和ZOG(非专利文献5)多个基因标识，但它们基本是同一分子。

而且，hDlk-1的细胞外区域的细胞膜附近被一种尚未鉴定的蛋白酶切断，并分泌到血液中。游离hDlk-1(hDlk-1细胞外区域)与225～262个氨基酸残基的被称为FA-1(Fetal antigen-1，胎儿抗原-1)(非专利文献6)的糖蛋白质是同一分子。

hDlk-1基因及其基因产物在未分化的增殖能力高的胚胎细胞中显示出高表达。尤其是，在胚胎肝脏、胚胎肾脏、胚胎骨骼肌、胚胎脑等中显示出高表达，但出生后，在大部分组织中没有发现表达，在正常的成体组织中，表达局限于肾上腺、胎盘、垂体中(专利文献1、非专利文献2)。

而且，即使在成体组织中，在被认为是未分化的干细胞和前体细胞的细胞中也发现了hDlk-1的表达。例如，hDlk-1在成体肝脏中未分化的具有多向分化潜力(multilineage potential)的肝卵圆细胞(非专利文献7、8)、骨/软骨/脂肪细胞的干细胞即间充质干细胞(非专利文献9)和前列腺的基底细胞层的前列腺上皮前体细胞(非专利文献18)中的表达已有报道。另外，据报道：在小鼠的间充质干细胞中，游离Dlk-1(小鼠Dlk-1细胞外区域)使ERK/MAP激酶活化，诱导Sox-9的表达，从而抑制向脂肪细胞的分化，同时诱导向软骨细胞的分化，但它们对向成骨细胞的分化和软骨细胞的成熟产生抑制(非专利文献19、20)。这些提示hDlk-1与组织干细胞的性质、例如未分化能力的维持等相关。

hDlk-1的这种局限于胎儿期的细胞和干细胞中表达的模式，以及具有EGF样基序的基因/基因产物的家族(Notch受体,Notch配体(δ,Jagged,serrate)等)一般通过EGF样基序介导的细胞间相互作用来控制细胞的增殖和分化，由此提示hDlk-1也具有这种功能。事实上，已知随着脂肪前体细胞的分化而表达降低，而且若在脂肪前体细胞中强制表达hDlk-1基因，则脂肪分化被抑制(非专利文献2)。但是，目前，与hDlk-1相互作用的分子(配体)的详细情况尚不清楚。

另一方面，据报道hDlk-1基因及其基因产物在各种癌和肿瘤中也以高频率表达。迄今为止，作为已确认其表达的癌的种类，在实体癌中，已知有神经内分泌肿瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、1型神经纤维瘤病、小细胞肺癌、肝癌、肾癌、卵巢癌、大肠癌、乳腺癌和胰脏癌(专利文献1、2、4、5和非专利文献1、3、10、11、12、13、14、21)，在血癌中，已知有骨髓发育异常综合征(专利文献3和非专利文献15、16)和急性髓系白血病(非专利文献16)。据报道如果在红白血病细胞株(erythroleukemia)K562细胞中导入hDlk-1基因，则细胞增殖受到促进(非专利文献16)，同样，如果在成胶质细胞瘤细胞中导入hDlk-1基因，不仅细胞增殖被促进，而且细胞的接触抑制也丧失，获得锚着非依存性的(anchorage-dependent)细胞增殖能力，这提示hDlk-1与致癌之间的关联性(非专利文献17)。

以往，针对人的肝癌细胞，作为在体外在补体存在下显示出细胞毒性的抗hDlk-1单克隆抗体，已知作为大鼠抗hDlk-1单克隆抗体的1C1、4C4和31C4(克隆名)(专利文献1)，另一方面，还已知这些克隆抗体不显示体内(人癌细胞荷瘤小鼠中的治疗模型)的抗肿瘤活性(肿瘤生长抑制活性)(专利文献4、5)。

＜专利文献＞