[发明专利]因子VII缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及因子VII多肽与肝素原（heparosan）聚合物的缀合。

背景技术

对血管的损伤会活化涉及细胞组分和分子组分之间的复杂相互作用的止血系统。最终造成出血停止的过程被称作止血。止血的一个重要部分是血液的凝固和凝块在损伤部位处的形成。凝固过程高度依赖于几种蛋白分子的功能。这些被称作凝血因子。一些凝血因子是可以以无活性酶原或酶活性形式存在的蛋白酶。通过另一种蛋白水解活性的凝血因子催化的多肽链的特异性切割，可以将酶原形式转化成它的酶活性形式。因子VII是一种维生素K依赖性的血浆蛋白，其在肝脏中合成并作为单链糖蛋白分泌进血液中。通过在单个部位（即在因子VII序列(野生型人凝血因子VII)的R152和I153之间）处的特异性蛋白水解性裂解，将因子VII酶原转化成活化形式(因子VIIa)，从而产生通过单个二硫键连接的双链分子。因子VIIa中的2个多肽链被称作轻链和重链，分别对应于因子VII序列的残基1-152和153-406。因子VII主要作为酶原进行循环，但是小部分处于活化形式(因子VIIa)。

可以将血液凝固过程分成3个阶段：起始、放大和传播。起始和传播阶段促成凝血酶的形成，所述凝血酶是一种在止血中具有许多重要功能的凝血因子。如果衬在血管的内表面上的单层内皮细胞屏障变得受损，则凝血级联开始。这会暴露血液中的血小板所附着的内皮下细胞和血管外基质蛋白。如果这发生，存在于内皮下细胞的表面上的组织因子(TF)变得暴露于在血液中循环的因子VIIa。TF是一种膜结合的蛋白，并充当因子VIIa的受体。因子VIIa是一种具有固有低活性的酶（丝氨酸蛋白酶）。但是，当因子VIIa结合至TF时，它的活性巨大地增加。因子VIIa与TF的相互作用也将因子VIIa定位在带有TF的细胞的磷脂表面上，并为了因子X至Xa的活化将它最佳地放置。当这发生时，因子Xa可以与因子Va组合以在带有TF的细胞的表面上形成所谓的“凝血酶原酶”复合物。凝血酶原酶复合物然后通过凝血酶原的裂解而产生凝血酶。通过将TF暴露于循环因子VIIa并导致凝血酶的最初产生而活化的途径被称作TF途径。TF:因子VIIa复合物也催化因子IX活化成因子IXa。然后，活化的因子IXa可以扩散至附着于损伤部位且已经被活化的血小板的表面。这允许因子IXa与FVIIIa组合以在活化的血小板的表面上形成“tenase”复合物。由于它在将因子X活化为Xa中的突出效率，该复合物在传播阶段中起关键作用。高效的tenase催化的因子Xa活性的产生又导致凝血酶原酶复合物催化的凝血酶原有效裂解为凝血酶。

如果在因子IX或因子VIII中存在任何缺陷，它会损害重要的tenase活性，并减少凝固所必需的凝血酶的产生。通过TF途径最初形成的凝血酶充当促进血小板在损伤部位处的募集、活化和聚集的促凝血信号。这导致松散的血小板初栓的形成。但是，该血小板初栓是不稳定的，且需要补强才能支持止血。所述栓的稳定化涉及将血小板锚定和缠结在纤维蛋白纤维网中。

强且稳定的凝块的形成依赖于局部凝血酶活性的稳健爆发的产生。因而，在血管损伤以后导致凝血酶产生的过程中的缺陷，可以导致出血障碍例如A型和B型血友病。具有A型和B型血友病的人分别缺少有功能的因子VIIIa或因子IXa。在传播阶段中的凝血酶产生关键性地依赖于tenase活性，即需要因子VIIIa和FIXa。因此，在具有A型或B型血友病的人中，血小板初栓的适当固结失败且出血继续。

替代疗法是A型和B型血友病的传统治疗，并且涉及因子VIII或因子IX的静脉内施用。但是，在许多情况下，患者形成针对输入的蛋白的抗体(也被称作抑制剂)，这会减少或消除治疗的效力。已经批准重组因子VIIa (Novoseven?)用于治疗具有抑制剂的A型或B型血友病患者，并且也被用于停止出血发作或预防与创伤和/或外科手术有关的出血。重组因子VIIa也已经被批准用于治疗具有先天性因子VII缺乏的患者。已经提出，重组FVIIa通过独立于TF的机制起作用。根据该模型，重组FVIIa借助于它的Gla-结构域被引导至活化的血小板的表面，在此处它然后将因子X蛋白水解地活化成Xa，从而绕过对功能性tenase复合物的需要。在没有TF存在下FVIIa的低酶活性以及Gla-结构域对膜的低亲和力可以解释对实现止血所需的超生理水平的循环FVIIa的需要。