[发明专利]HLA G修饰的细胞及方法

说明书

本发明公开了可持续表达HLA‑G(例如细胞表面HLA‑G)的遗传修饰的细胞和用于产生此类遗传修饰的细胞的核酸组合物。还公开了利用可持续表达HLA‑G的遗传修饰细胞的细胞治疗方法。本发明的HLA‑G遗传修饰可提供具有减低的免疫原性和/或改进的免疫抑制特征的细胞，以使得这些细胞可作为通用或改进的供体细胞用于移植、细胞和组织再生或重建以及其他治疗。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2012年7月31日提交的美国临时专利申请序列号61/677,739的优先权益，其以引用方式全文纳入本文。

背景技术

细胞移植形式的再生医学是可用于治疗疑难医学病况例如糖尿病、心脏病和神经退行性疾病的最有希望的治疗方法之一。但是，临床中实现细胞移植的主要障碍是供体细胞的免疫排斥，特别当其来自外源宿主时。虽然通过给予免疫抑制药物可部分地解决免疫排斥，然而其也会产生严重的副作用。因此，需要开发改进的技术用于细胞移植治疗。

发明内容

本发明公开了基于细胞的组合物和基于在将要被移植到需要供体细胞的受试者中的供体细胞中长期强制表达至少一种外源HLA-G蛋白进行细胞移植治疗的方法。本发明提供的数据显示，经本发明所述方式修饰可表达外源HLA-G的细胞(无论多能性的或分化型的)具有减低的免疫原性和/或增加的免疫抑制。通过HLA-G遗传修饰产生的减低的免疫原性和/或增加的免疫抑制能力是稳定的并且可持续长时间，包括贯穿分化过程。这意味着本发明的HLA-G修饰的细胞可作为通用的供体细胞或组织(即，减少或排除供体细胞和受体之间I类和II类经典人白细胞抗原(HLA)分子配型的需要)用于多种损伤、疾病或病症。

相应地，本发明一方面是遗传修饰的哺乳动物细胞(HLA-G修饰的细胞)，其与不含所述遗传修饰的哺乳动物细胞相比在异体移植受体(an allogeneic recipient)中具有减低的免疫原性和/或能够提供增加的免疫抑制，其中(i)所述遗传修饰的哺乳动物细胞包含：(a)外源核酸(例如表达载体)，其包含编码与人HLA-G具有至少85％氨基酸序列同一度的HLA-G蛋白并且含有可减低内质网-高尔基体循环途径中HLA-G存留的一种或多种氨基酸突变的核酸序列，和/或(b)不含microRNA结合位点的3’UTR(非翻译区)序列例如SEQ IDNO:3或不含SEQ ID NO:4的序列；并且(ii)编码的HLA-G蛋白是由遗传修饰的哺乳动物细胞表达至少7周(例如至少20周或至少50周)。

另外的实施方案中，本发明提供了遗传修饰的哺乳动物细胞，其与不含所述遗传修饰的哺乳动物细胞相比具有减低的免疫原性和/或改进的免疫抑制，其中(i)所述遗传修饰的哺乳动物细胞含有外源核酸，其包括：(a)核酸序列(例如SEQ ID NO:2)，其编码与同义野生型人HLA-G(例如SEQ ID NO:1)具有至少95％氨基酸序列同一度的HLA-G蛋白，并且含有可减低内质网-高尔基体循环途径中HLA-G存留的一种或多种氨基酸突变；和(b)3’非翻译区(UTR)(例如SEQ ID NO:3)，其与同义野生型人HLA-G基因的3’非翻译区序列具有至少85％的同一度，并且不含SEQ ID NO:4；并且(ii)编码的HLA-G蛋白是由遗传修饰的哺乳动物细胞表达至少7周。

在一些实施方案中，遗传修饰的细胞具有减低的免疫原性和/或改进的免疫抑制，如果其显示出：(1)与不含所述遗传修饰的哺乳动物细胞相比，遗传修饰的细胞的NK-92细胞毒性减低，(2)与不含所述遗传修饰的哺乳动物细胞相比，遗传修饰细胞的体外的外周血单核细胞增殖减低，和/或(3)在人源化NSG小鼠中，与不含所述遗传修饰的哺乳动物细胞相比，遗传修饰的细胞增加肿瘤形成的大小和重量。