[发明专利]食物中毒菌的培养基及食物中毒菌的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及培养食物中毒菌的技术，尤其涉及在同一培养基中同时培养多种食物中毒菌的技术。

背景技术

近年来，每年会发生超过千件的食物中毒事件。在发生食物中毒事件的情况下，为了对成为原因的食物中毒菌进行确定，要进行增殖对象菌以判定其种类的操作。在增殖对象菌时，基于保健站的技师的经验，对被推测为原因的对象菌全部进行单一培养。该单一培养中，需要对每种对象菌考虑多种培养基及培养条件等。

在这种现有方法中，存在食物中毒菌的培养及其检测需要花费大量的时间和成本、劳力的问题。

因此，以食物中毒菌的培养及检测中的省力化及迅速化、减少消耗品废弃为目的，正在研究开发在同一培养基中同时培养多种食物中毒菌的技术。

例如，根据专利文献1中记载的方法，能够同时培养金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、弧菌、蜡状芽孢杆菌及李斯特菌这6种食物中毒菌。

另外，在专利文献2中记载的方法中，记载了能够同时培养包含难以增殖的李斯特菌在内的多种食物中毒菌。

专利文献1：日本特开2008-48670号公报

专利文献2：日本专利第4621919号公报

发明内容

发明要解决的课题

但是，专利文献1中使用的培养基存在难以稳定地培养对象菌的问题。特别是，在含有倍增速率快的对象菌或杂菌等非对象菌的情况下，存在会因其影响而使一部分对象菌的倍增速率变慢、无法适当增殖的问题。

另外，专利文献2中使用的培养基存在无法充分增殖金黄色葡萄球菌、无法适当地检测出金黄色葡萄球菌的问题。

此外，专利文献1及2中，目的在于使对象菌增殖为10³cfu/ml以上，因此，存在对于用于迅速检验法等而言灵敏度不足、缺乏通用性的问题。

于是，本发明人进行了深入研究，成功开发出了能够同时增殖在食品检验、流行病学环境检验、环境检验及临床试验、家畜卫生中重要的4种食物中毒细菌即大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、及副溶血弧菌的培养基。

此处，一般的迅速检验法(免疫层析法、ELISA法等)的检测下限为10⁵cfu/ml，因此，若考虑作为这些检验法的培养基进行利用的情况，则希望在实用的培养时间内将对象菌增殖为10⁵cfu/ml以上。另外，对于食物中毒菌来说，在生物化学试验中需要进行毒素产生的评价，在过去的大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及副溶血弧菌的食物中毒发生事例中，对象菌以10⁵cfu/ml以上存在时会产生毒素，引起食物中毒。因此，从这种观点出发，也希望将对象菌增殖为10⁵cfu/ml以上。

此外，在同时检验多种食物中毒菌时，不同种类的食物中毒菌间的菌数之差很重要。即，在使用了多重PCR等的迅速检验法中，若菌数之差高至10³cfu/ml以上，则在同时扩增多种食物中毒菌的情况下，相对较少的菌无法适当地扩增，难以检测。因此，希望按照菌数之差小于10³cfu/ml的方式使其增殖。

本发明是鉴于上述情况进行的，其目的在于提供能够同时适当地增殖包含金黄色葡萄球菌的多种食物中毒菌的食物中毒菌的培养基、以及食物中毒菌的检测方法。

用于解决课题的方案

为了达到上述目的，本发明的食物中毒菌的培养基的构成为：含有蛋白胨、酵母提取物及硫酸镁。

另外，本发明的食物中毒菌的检测方法为下述方法：利用含有蛋白胨、酵母提取物及硫酸镁的培养基，使至少包含金黄色葡萄球菌的多种食物中毒菌同时增殖，由所增殖的食物中毒菌提取DNA，将用于对食物中毒菌的DNA的扩增对象区域进行特异性扩增的引物加入至PCR用溶液，通过PCR使扩增对象区域扩增，对所得到的扩增产物进行检测。

发明的效果

根据本发明，能够利用同一培养基同时适当地增殖包含金黄色葡萄球菌的多种食物中毒菌。

附图说明

图1是示出对本发明实施方式的合用了蛋白胨、酵母提取物及硫酸镁的培养基进行了验证的试验1的结果的图。

图2是示出对本发明实施方式的培养基的最佳蛋白胨浓度进行了验证的试验2的结果的图。

图3是示出对本发明实施方式的培养基的最佳氯化钠浓度进行了验证的试验3的结果的图。

图4是示出对本发明实施方式的培养基的最佳糖浓度进行了验证的试验4的结果的图。