[发明专利]使用小分子从多能干细胞产生胰内胚层

权利要求书

1.产生表达至少5% PDX1/NKX6.1双阳性的胰细胞或胰细胞前体的方法，包括将定形内胚层细胞暴露于有效量的下列各组化合物中的各至少一种：

a. BMP抑制剂，和

b. 激酶抑制剂，和

c. 视黄酸受体激动剂，

以使定形内胚层细胞分化为胰细胞或胰细胞前体，

其中所述激酶抑制剂为JNK抑制剂II并且与视黄酸受体激动剂AM580组合，其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。

2.权利要求1的方法，其中所述BMP抑制剂为LDN-193189。

3.权利要求1的方法，其中所述激酶抑制剂和视黄酸受体激动剂与bFGF组合。

4.权利要求1的方法，其中所述激酶抑制剂和视黄酸受体激动剂与FGF7或FGF10组合。

5.权利要求1的方法，包括将定形内胚层细胞暴露于有效量的无bFGF的LDN-193189的第一步骤，和在bFGF存在下暴露于JNK抑制剂II与AM580组合的第二步骤。

6.权利要求1的方法，包括将定形内胚层细胞暴露于有效量的LDN-193189，随后暴露于由以下组成的组中的至少一种化合物：

wnt抑制剂，和/或

hedgehog抑制剂。

7.权利要求6的方法，其中所述wnt抑制剂为IWP2。

8.权利要求6的方法，其中所述hedgehog抑制剂为环巴胺。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为至少5%PDX1/NKX6.1双阳性。

10.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为至少10%PDX1/NKX6.1双阳性。

11.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为10-30%PDX1/NKX6.1双阳性。

12.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为10-40%PDX1/NKX6.1双阳性。

13.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为5-70%PDX1/NKX6.1双阳性。

14.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为10-80%PDX1/NKX6.1双阳性。

15. 权利要求1-8中任一项的方法，其中所述胰细胞或胰细胞前体为5-100% PDX1/NKX6.1双阳性。

16.产生胰细胞或胰细胞前体的方法，其将定形内胚层细胞体外暴露于靶向JNK1、2或3的激酶抑制剂而产生，其中所述靶向JNK1、2或3的激酶抑制剂为JNK抑制剂II。

17.权利要求16的方法，其中定形内胚层细胞还暴露于下列化合物的至少一种：

LDN-193189，

Wnt抑制剂，

hedgehog抑制剂，

视黄酸受体激动剂；

其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。

18.权利要求16的方法，其中将定形内胚层细胞暴露于JNK抑制剂II与表2中所列视黄酸受体激动剂的组合，其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。

19.JNK抑制剂II化合物从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细胞前体的用途，其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。

20.JNK抑制剂II和LDN-193189组合从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细胞前体的用途，其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。

21.JNK抑制剂II与视黄酸受体激动剂组合从胰内胚层前体诱导胰细胞或胰细胞前体的用途，其中所述JNK抑制剂II为具有或不具有N-烷基化的1,9-吡唑并蒽酮的异构体或互变异构体。