[发明专利]用于抗体纯化的载体、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种固定化载体，所述固定化载体不具有整体结构，蛋白通过静电相互作用吸附在所述固定化载体上，所述整体结构是指具有从顶面至底面贯穿延伸的大孔的多孔体，所述多孔体的特征在于在所述大孔里面具有微孔，并且所述多孔体具有1至100μm的大孔和0至100nm的微孔，所述蛋白由通过通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列组成，其中由R1-R2-R3表示的部分被用于固定在所述固定化载体上，其中：

所述序列表示从氨基末端侧到羧基末端侧的序列；

R1部分的序列可不存在，且如果存在，是包含除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基的序列；

R2部分的序列是由SEQ ID NO:4至7的任何序列组成的蛋白A的A-结构域的突变体蛋白的序列，或其中由SEQ ID NO:4至7的任何序列组成的蛋白A的A-结构域的突变体蛋白的序列的1至3个单位被连接在一起的序列；

R3部分的序列可不存在，且如果存在，是包含除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基的间隔序列；

R4部分的序列是包含由半胱氨酸-X表示的2个氨基酸残基的序列，其中X表示丙氨酸或除丙氨酸和半胱氨酸之外的氨基酸残基；

R5部分的序列可不存在，且如果存在，是不包含赖氨酸和半胱氨酸残基的序列，以及是包含能够使得由通过通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列组成的整个蛋白的等电点在酸性侧的酸性氨基酸残基的序列；且

R6部分的序列是用于蛋白纯化的亲和标签序列。

2.根据权利要求1所述的固定化载体，其中所述蛋白A的A-结构域的突变体蛋白是以下蛋白A的A-结构域的突变体蛋白：当抗体与固定在阵列基板上的所述蛋白A的A-结构域的突变体蛋白结合并用pH 5.0的0.1M的柠檬酸钠溶液洗脱时，其直到一半量的结合的所述抗体解离时经过的时间(T_0.5)和其与所述抗体的解离常数，与由SEQ ID NO:3表示的蛋白A突变体的T_0.5和解离常数相比是减小的。

3.根据权利要求1所述的固定化载体，其中由通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列中所述R3部分的序列是由1至10个甘氨酸残基组成的序列。

4.根据权利要求1所述的固定化载体，其中由通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列中所述R5部分的序列是由天冬氨酸和/或谷氨酸的氨基酸残基组成的1至10个氨基酸残基的序列。

5.根据权利要求4所述的固定化载体，其中由通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列中所述R5部分的序列是由1至10个天冬氨酸残基组成的序列。

6.根据权利要求1所述的固定化载体，其中由通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列中所述R6部分的序列是由4个或更多个组氨酸残基组成的序列。

7.根据权利要求1所述的固定化载体，其中所述蛋白被固定在载体上以成为固定化载体，其中所述载体选自由以下组成的组：二氧化硅载体、玻璃珠和聚合物。

8.一种用于制备根据权利要求1所述的固定化载体的方法，包括通过静电相互作用将由通过通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列组成的蛋白吸附至载体。

9.一种固定化载体，其上固定有蛋白A突变体，所述固定化载体通过以下方法制备：将根据权利要求1的由通过通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列组成的蛋白中存在的唯一半胱氨酸残基的巯基基团转化为硫氰酸基基团，并使所得物作用于具有伯胺作为官能团的任何固定化载体，用于使R1-R2-R3部分作为所述蛋白的半胱氨酸残基的氨基末端侧存在的氨基酸序列部分通过酰胺键合与所述载体结合。

10.一种用于制备根据权利要求8所述的固定化载体的方法，包括将根据权利要求1至7任一项的由通过通式：R1-R2-R3-R4-R5-R6表示的氨基酸序列组成的蛋白中存在的唯一半胱氨酸残基的巯基基团转化为硫氰酸基基团，并使所得物作用于具有伯胺作为官能团的任何固定化载体，用于使R1-R2-R3部分作为所述蛋白的半胱氨酸残基的氨基末端侧存在的氨基酸序列部分通过酰胺键合与所述载体结合。

11.一种用于抗体纯化的亲和色谱柱，所述亲和色谱柱以根据权利要求9所述的固定化载体填充。