[发明专利]用于肿瘤治疗的基于EGFRvIII序列的肽疫苗

说明书

发明领域

本发明涉及可用于针对表达III型突变型表皮生长因子受体的癌细胞产生免疫应答的肽靶标。本发明涉及疫苗及在抗癌治疗和方案中使用所述疫苗的方法。

发明背景

本发明是在政府支持下，在美国国立卫生研究院授予的合同CA 124832下进行。政府享有本发明中的某些权利。

本申请要求2012年8月2日提交的美国临时专利申请号61/678,800的优先权，所述专利申请以引用方式并入本文。

表皮生长因子受体(在人中也被称为EGFR、ErbB-1、HER1)为细胞表面受体，当它与特定配体如表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α(TGFα)结合时，其被激活。对应于正常EGF受体的cDNA序列公开于Ullrich等Nature 1984309,418-425中。

Wong等，Proc Natl Acad Sci USA 1992,89,2965-2969和PCT申请号PCT/US90/04489报道了五个恶性神经胶质瘤中，与编码EGFR的基因的重排或缺失相关的基因改变，其包括被称为III型突变型EGF受体(以下为EGFRvIII)的变异型EGFR，该变异型EGFR为对应于EGF受体cDNA中核苷酸275-1075之间的缺失的EGFR基因的剪接变体的翻译产物，所述缺失对应于编码受体的胞外结构域的编码序列的一部分的缺失，所述编码序列的一部分的缺失对应于外显子2至7，使得外显子1接合到外显子8。由该缺失形成的同框剪接接头包括编码两个序列接合处的甘氨酸残基的密码子。未在正常的EGFR基因中的正常外显子1编码序列或正常外显子8编码序列中相应的位置处找到此甘氨酸残基编码序列。EGFRvIII缺失导致通常情况下远距离的序列的融合而产生在此融合接头编码新颖肽序列的突变序列。

EGFRvIII是在人肿瘤中最经常出现的天然存在的突变型EGFR，并且在被称为多形性成胶质细胞瘤的脑肿瘤中尤为普遍。据报道，EGFRvIII存在于56％的成胶质细胞瘤和16％的非小细胞肺癌中。Moscatello等Cancer Res.1995,55,5536-5539报道已发现所述EGFRvIII存在于78％的乳腺癌中。因此EGFRvIII被鉴定为潜在理想肿瘤靶标，因为未在任何正常组织中发现该序列。

对应于外显子2至7的缺失，其中外显子1接合到外显子8，所述缺失为产生接头处的新甘氨酸的密码子的同框改变。所产生EGFRvIII蛋白的氨基末端的特征在于氨基酸序列LEEKKGNYVVTDH，SEQ ID NO:1，其中L代表成熟蛋白的第一个氨基酸，并且G为外显子1至8融合的结果。

使用包含对应于EGFRvIII接头的肽的疫苗以预防在动物模型中过度表达EGFRvIII的肿瘤或诱导这种肿瘤的消退。使用肽LEEKKGNYVVTDHC SEQ ID NO:2(其中添加了末端半胱氨酸以用于缀合目的)缀合到免疫刺激分子KLH来形成疫苗。虽然没有任何直接实验证据，但是认为甘氨酸是此肽被免疫系统识别为异物的关键特征，因为其为新颖的。现在这种特定的肽:KLH缀合疫苗已用于针对成胶质细胞瘤的II期临床试验中，其中与匹配的历史对照组的15个月相比，其表现出26个月的平均存活期。

基于由剪接接头编码的蛋白质序列的肽描述于美国专利号6,224,868、5,212,290、5,401,828、5,710,010、5,814,317、5,981,725、6,127,126和6,455,498中。此外，这些专利公开了缀合至载体如钥孔血蓝蛋白(KLH)的肽以及其作为疫苗的用途。Sampson等美国公布号20090220551公开了具有不同C末端的EGFRvIII肽并且大体公开了在癌症治疗方案中使用所述肽作为辅助疗法的方法。