[发明专利]胶原肽组合物的制造方法、DPP‑4阻碍剂和血糖值升高抑制剂

说明书

技术领域

本发明涉及胶原肽组合物的制造方法、含有所述胶原肽组合物的二肽基肽酶4阻碍剂(以下简称为DPP-4阻碍剂)和血糖值升高抑制剂。

背景技术

近年来，从胶原、明胶的水解物中发现大量的活性肽。作为活性肽的用途，有以Hyp-Gly为关节炎、褥疮抑制剂(专利文献1)、以Ala-Hyp、Leu-Hyp、Ala-Hyp-Gly为明胶合成促进剂(专利文献2)、以Gly-X-Y-(Gly-Z-W)表示的肽为血糖值升高抑制剂(专利文献3)、以Gly-Pro-Ala-Gly为DPP-4阻碍剂(专利文献4)、以Pro-Hyp的成纤维细胞增殖促进作用为化妆品(专利文献5)等大量的报告。另外，关于口服摄取了胶原、明胶时的消化、吸收、代谢，报告了Pro-Hyp、Ala-Hyp、Leu-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly等二肽、三肽在血中存在(非专利文献1)、Hyp-Gly在血中存在(非专利文献2)。由于这些肽具有生理活性(专利文献1、专利文献2、专利文献5)，因此，二肽、三肽在血中转移被认为是胶原在口服摄取中的机制之一。水解胶原、明胶的蛋白质分解酶数量众多，为了通过其中的任何一个、或它们的组合来有效地生成生理活性肽而进行研究，蛋白质分解酶的选择成为重要的因素之一。

胶原具有甘氨酸每三个残基便重复、以所谓被称作胶原样序列的-(Gly-氨基酸X-氨基酸Y)n-表示的特征性氨基酸序列，作为每到该单元便分解的蛋白质分解酶，具有细菌胶原酶。使用细菌胶原酶进行分解的方法是得到Gly-X-Y型肽的优异方法。作为关于由细菌胶原酶生成的肽的生理活性的报告，有使用所述以Gly-X-Y-(Gly-Z-W)表示的肽的血糖值升高抑制剂(专利文献3)、使用Gly-Ala-Arg等三肽的胶原生成促进剂(专利文献6)等。

另一方面，也有使多个蛋白质分解酶组合地以多个阶段进行反应来获得所需要的肽的方法。例如有为了制造含有L-脯氨酰基-L-羟基脯氨酸的组合物，首先用具有胶原酶活性的蛋白酶进行处理，接着使肽链端解酶作用的方法(专利文献7)。另外，也有为了得到Glu-Hyp-Gly、Leu-Hyp-Gly、Ser-Hyp-Gly，在1次酶处理中使来自胶原酶、黄曲霉的蛋白酶作用，接着作为2次酶处理，在从N末端起第2个存在除脯氨酸或羟基脯氨酸以外的氨基酸的情况下使氨基酸从N末端起游离的肽酶作用，从而生成1次酶处理物不含有的肽的方法(专利文献8)。

另一方面，下述公知的：生姜中含有生姜蛋白酶(Zingibain)(非专利文献3)；胶原也可被除细菌胶原酶等以外的生姜蛋白酶分解(非专利文献4)；以及从将生姜根茎在极性溶剂中粉碎、干燥该过滤残渣而成的粉末中提取的酶的蛋白酶活性比直接从生姜根茎中提取的酶的蛋白酶活性高。

并且已知：生姜蛋白酶是脯氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶，在从N末端侧读取时，切断与Pro的C末端侧相邻的氨基酸残基与下一个氨基酸残基之间的肽键(专利文献9)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2010-106003号公报

专利文献2：日本特开2010-24200号公报

专利文献3：国际公开第2008/66070号

专利文献4：国际公开第2013/65832号

专利文献5：日本特开2007-1981号公报

专利文献6：日本特开2003-137807号公报

专利文献7：日本特开2012-135222号公报

专利文献8：国际公开第2012/102308号

专利文献9：日本特表2007-522822号公报

非专利文献

非专利文献1：J.Agric.Food Chem.2005Aug 10；53(16):6531-6536.

非专利文献2：Food Chemistry 1291019-10242011.

非专利文献3：生姜蛋白分解酶的分离纯化、营养与粮食,1973年,26卷6号,p377-383.

非专利文献4：Plant collagenase:unique collagenolytic activity of cysteine proteases from ginger,Biochim Biophys Acta,2007年,1770卷12号,p1627-1635.