[发明专利]样品制备方法

权利要求书

1.一种产生标记的核酸文库的方法，其包括以下步骤：

使来源于第一随机寡核苷酸群体的第一寡核苷酸与文库模板退火；

从退火的第一寡核苷酸群体进行文库模板指导的核酸延伸；

亲和标记第一延伸产物；

终止文库模板指导的核酸延伸，以产生不确定长度的第一延伸产物的群体；

将来源于第二随机寡核苷酸群体的第二寡核苷酸序列添加到第一延伸产物的3’端附近；

使得产生核酸分子的标记的文库，其包含各自独立地包含第一寡核苷酸序列、模板衍生的不确定长度的核酸序列和第二寡核苷酸序列的核酸，

其中所述模板衍生的核酸序列为至少200bp。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述文库模板指导的核酸延伸包括向所述第一延伸产物中引入亲和标签。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述终止文库模板指导的核酸延伸包括引入ddNTP。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述终止文库模板指导的核酸延伸包括引入包含亲和标签的ddNTP。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述终止文库模板指导的核酸延伸包括引入生物素标记的ddNTP。

6.根据权利要求1所述的方法，其包括亲和纯化所述第一延伸产物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述将第二寡核苷酸序列添加到第一延伸产物的3’端附近包括：

使包含所述第二寡核苷酸序列的寡核苷酸群体与所述第一延伸产物退火；以及

使所获得的组合物与包含具有链置换活性的DNA聚合酶的核酸延伸混合物接触，以形成与第一延伸产物退火的第二延伸产物。

8.根据权利要求1所述的方法，其包括对所述标记的文库的至少一个成员进行测序。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述文库模板包含基因组DNA。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述文库模板包含信使RNA。

11.根据权利要求10所述的方法，其包括对文库进行测序。

12.一种将核酸样品细分为适合测序的文库成分的方法，所述方法包括以下步骤：

使核酸样品与随机寡核苷酸群体、DNA聚合酶、dNTP、适合核酸延伸的缓冲液、亲和标签和核酸链延伸终止部分接触，

提供适合退火和核酸延伸的条件，

使核酸样品与亲和标签结合部分接触，和

将结合的组分与未结合的组分分离；

其中结合的组分包含适合于测序的文库成分；并且

其中所述结合的组分包括至少200bp的不确定长度。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述亲和标签是生物素标记的NTP。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述亲和标签是生物素标记的dNTP。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述亲和标签是生物素标记的ddNTP。

16.根据权利要求12所述的方法，其中所述核酸链延伸终止部分是生物素标记的ddNTP。

17.根据权利要求12所述的方法，其中所述DNA聚合酶具有链置换活性。

18.根据权利要求12所述的方法，其中所述DNA聚合酶能够在延伸核酸的3’端引入生物素标记的ddNTP。