[发明专利]针对高度保守靶标的包含来自骆驼科之序列的抗体

说明书

技术领域

本发明涉及抗原结合多肽，并且特别是来源于骆驼科(camelid)物种的常规抗体，所述抗体与靶抗原特异性结合，所述靶抗原是自身抗原或高度保守抗原。

背景技术

单克隆抗体作为研究工具具有许多应用，并且越来越多地作为治疗或诊断剂。特别地，治疗性抗体的开发是医药行业中增长最快的领域之一。产生针对给定治疗靶标的高质量单克隆抗体是在治疗性抗体药物的开发中成功的关键。迄今为止，已经开发了许多可以生产针对治疗目的之靶抗原的单克隆抗体(包括全人或“人源化”抗体)的不同技术平台。这些技术平台可大致分为体内的方法(基于使用经免疫的动物)，以及体外的方法，其中抗体序列是使用技术(例如噬菌体展示)从抗体可变链cDNA文库中选择的。

尽管均可使用用于单克隆抗体开发的体内和体外平台，但是生产与跨物种“高度保守的”抗原特异性结合的抗体和生产针对“自身”抗原的抗体仍是特别困难的。Zhuo等，PLoS ONE，第4卷，第6期，2009年6月讨论了由于免疫耐受性，在针对小鼠自身抗原或者在小鼠与人类之间高度保守抗原的抗体生产中使用基于免疫动物(特别是小鼠)的常规单克隆抗体方法所出现的特别困难之处。

为克服与自身抗原或高度保守抗原相关之免疫耐受性的之前的尝试已经包括使用特异性敲除小鼠或者使用具有受损的免疫耐受性的小鼠品系。然而，存在与这些方法中的每个相关的缺点；产生对于每个保守的目的抗原的敲除小鼠是昂贵且耗时的，而通过免疫具有受损耐受性的小鼠产生的抗体可能是质量可变的，即可表现出低亲和力和/或对靶抗原的低特异性。

在别处已经报道了可以从非免疫人噬菌体展示文库分离针对人抗原的人抗体(Griffiths等EMBO J.第12卷.，725-734，1993)。这种方法的潜在缺点是，合成的噬菌体展示文库只是接近天然存在于人类种系的功能多样性，因而多样性是比较有限的。此外，使用非免疫文库产生的抗体不是来源于通过主动免疫体内选择的CDR，因而通常必须进行亲和力成熟(affinity maturation)以提高对靶抗原的亲和力。亲和力成熟是一个冗长的过程，其可能会大大增加抗体发现过程的时间。此外，在亲和力成熟过程中，可能会改变某些氨基酸残基，这可能对所得的抗体的结合特异性或可制造性(例如表达水平、溶解性、物理化学稳定性等)产生负面影响(Wu等，J.Mol.Biol.368：652-65(2007))。

发明内容

开发用于产生针对高度保守靶抗原的抗体之技术上简单的平台仍是本领域中的一个目标，其不受现有技术方法所遇到的问题(例如，低亲和力、低特异性、多样性差)困扰。特别地，期望开发用于产生针对高度保守靶抗原之抗体的平台，其基于通过主动免疫体内选择CDR，因而避免了对亲和力成熟的需求和与所得抗体的“可制造性”相关的问题。

现在已经观察到可通过骆驼科(Camelidae)物种的主动免疫产生针对自身抗原和高度保守靶抗原的高亲和力免疫特异性抗体。即便使用展示出与最近的骆驼科同源物具有高于90％，并且高达97％氨基酸序列同一性的人多肽，通过动物的简单免疫可产生高特异性、高亲和力的抗体，而无需产生敲除或以其他方式操作动物的遗传背景或其天然免疫功能。通过骆驼科动物的简单免疫来打破自身耐受性屏障的能力是非常出乎意料的，并且提高了产生有用的抗体的机会，所述有用抗体包括具有潜在治疗效用的针对一系列高度保守靶标的抗体，之前认为这是超越已知的单克隆抗体平台的范围的。

因此，在第一个方面，本发明提供了包含VH结构域和VL结构域之分离的抗原结合多肽，其中在所述VH结构域或所述VL结构域中的至少一个高变环或互补决定区(CDR)获得自骆驼科物种的VH或VL结构域，其特征在于，所述抗原结合多肽与靶抗原特异性结合，所述靶抗原是在包括至少所述抗原结合多肽之表位的序列比较窗口表现出与来自所述骆驼科物种的蛋白质具有至少90％，或者至少95％、96％、97％或98％氨基酸序列同一性的多肽抗原。

在一个实施方案中，靶抗原是在包括包含抗原结合多肽之表位的靶抗原的至少一个结构域的序列比较窗口表现出与来自所述骆驼科物种的蛋白质具有至少90％，或者至少95％、96％、97％或98％氨基酸序列同一性的多肽抗原。

在一个实施方案中，靶抗原是在全长的靶抗原表现出与来自所述骆驼科物种的蛋白质具有至少90％，或者至少95％、96％、97％或98％氨基酸序列同一性的多肽抗原。