[发明专利]人胚胎干细胞衍生的间充质样干细胞、方法及其应用

权利要求书

1.一种产生用于治疗自身免疫性疾病的临床级别间充质干细胞的方法，其中所述方法包括以下步骤：

a.使用含或不含GSK3抑制剂的无血清培养基培养人胚胎干细胞；

b.将人胚胎干细胞培养在包含血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4(BMP4)的无血清培养基中，其中，血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4的量足以诱导所述人胚胎干细胞形成胚状体；

c.向培养物中添加至少一种生长因子，其中，所述生长因子的量足以扩增人血管集落形成细胞；

d.把所述血管集落形成细胞分散成单细胞；和

e.将所述单细胞培养在1)含10-20％FBS的alpha-MEM、2)含10-20％KOSR的alpha-MEM、3)含10-20％FBS的高糖DMEM、或4)含10-20％KOSR的高糖DMEM培养基中，其中，培养基的量足以诱导所述单细胞分化为间充质干细胞；

所述间充质干细胞具有以下特征：(i)包含>95％的细胞表达组-1标记；(ii)包含>80％的细胞表达组-2标记；(iii)包含<5％的细胞表达组-3标记；(iv)表达IL-10和TGFβ；(v)包含<2％的细胞表达IL-6、IL-12和TNFα；(vi)包含<0.001％的细胞共表达所有组-4标记，其中，组-1标记是：CD73、CD90、CD105、CD146、CD166和CD44，组-2标记是：CD13、CD29、CD54和CD49E，组-3标记是：CD45、CD34、CD31和SSEA4，组-4标记是：OCT4、NANOG、TRA-1-60和SSEA4。

2.权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞不表达IL-6、IL-12和TNFα。

3.权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞表达TGF-β1、TGF-β2和IL10。

4.权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞不表达CCL2、MMP2和RAGE。

5.权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞与由骨髓产生的间充质干细胞(BM-MSC)相比较，表达低水平的IFNγR1和IFNγR2。

6.通过权利要求1～5任一项所述方法制备的间充质干细胞。

7.如权利要求6所述的间充质干细胞，其特征还在于：不表达或低水平表达VCAM1。

8.权利要求6所述的间充质干细胞，进一步受到辐射。

9.权利要求7所述的间充质干细胞，进一步受到辐射。

10.一种包含权利要求6所述间充质干细胞的细胞培养物。

11.一种包含权利要求7所述间充质干细胞的细胞培养物。

12.一种包含权利要求8所述间充质干细胞的细胞培养物。

13.一种包含权利要求9所述间充质干细胞的细胞培养物。

14.一种药物制剂，其包含权利要求6所述的间充质干细胞以及药学上可接受的载体。

15.一种药物制剂，其包含权利要求7所述的间充质干细胞以及药学上可接受的载体。

16.一种药物制剂，其包含权利要求8所述的间充质干细胞以及药学上可接受的载体。

17.一种药物制剂，其包含权利要求9所述的间充质干细胞以及药学上可接受的载体。

18.权利要求6～9任一项所述的间充质干细胞在制备用于治疗T细胞和/或B细胞相关的自身免疫性疾病的药物中的用途。

19.权利要求14～17任一项所述的药物制剂在制备用于治疗T细胞和/或B细胞相关的自身免疫性疾病的药物中的用途。

20.权利要求6～9任一项所述的间充质干细胞在制备用于治疗多发性硬化症的药物中的用途。

21.权利要求14～17任一项所述的药物制剂在制备用于治疗多发性硬化症的药物中的用途。

22.试剂盒，其包含权利要求6～9任一项所述间充质干细胞和载体。