[发明专利]核酸提取用成套工具及核酸提取装置

说明书

技术领域

本发明涉及使用磁珠或能磁化的珠子从含有细胞、细菌、病毒等的试样对核酸(DNA或RNA)或蛋白质等生物学分子进行与提取、分离、精制等(以下称为提取)相关的各种处理的核酸提取装置的核酸提取用成套工具及核酸提取装置。

背景技术

从血液、血浆、组织片等生物学试样提取核酸等生物学分子不仅是生物学、生物化学、医学等生命现象的研究，也是用于在诊断或农作物的品种改良、食品检查之类的产业中得到检查物质的基本且重要的操作。尤其核酸的检查能够对DNA或RNA增幅的PCR(Polymerasechain reaction)法普及开来，因此，用PCR法提取能增幅的精制的核酸的要求增高。另外，除了PCR法之外，还开发出NASBA(Nucleic Acid Sequence-Based Amplification)法、SDA(strand displacement amplification)法、3SR(self-sustained sequence replication)法、TMA(transcription-mediated amplification)法、Qbeta replicase amplification法、LAMP(loop-mediated isothermal amplification)法等多种核酸增幅法，因此，核酸检查的应用范围拓宽，从生物学试样提取核酸的要求越来越高。

作为从生物学试样提取DNA或RNA等核酸的方法，已知苯酚/氯仿提取法。但是，该方法由于使用有害的有机溶剂及操作复杂，作业人员的负担大。因此，为了解决上述问题点，提出了利用在具有离液剂的环境下二氧化硅或玻璃纤维等与核酸结合的性质的方法(例如非专利文献1)，也提出了进行核酸提取的自动装置(例如专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2003-504195号公报

专利文献2：日本特开2004-337137号公报

非专利文献

非专利文献1：Boom，R.，Sol，C.J.A.Salimans，M.M.M.，Jansen，C.L.，Wertheimvan Dillien，P.M.E.，and van der Noordaa，J.，J.C1in.Microbiol.，28，495-503(1990)

发明内容

发明所要解决的课题

利用自动装置通常实施的核酸提取的流程如以下的(1)～(6)。(1)利用含有离液剂或界面活性剂的溶液使细胞破碎，使核酸溶出到溶液中。(2)在溶液中添加在表面涂布了二氧化硅的磁珠(磁性二氧化硅粒子)并混合，从而在粒子表面吸附核酸。(3)从反应容器的外部使磁铁接近，在将磁珠捕获到反应容器中的状态下使用泵等除去含有蛋白质等不需要物质的溶液。(4)在反应容器中添加清洗液，使不需要物质向溶液中移动。(5)再次从反应容器的外部使磁铁接近，在将磁珠捕获到反应容器中的状态下除去含有不需要物质的溶液。(6)除去清洗液后，对磁珠添加灭菌水或低盐浓度的缓冲剂，使核酸从磁珠表面溶解并去除。

在上述(1)至(6)的工序中的问题点在于，难以利用连接在泵等上的液体吸引线完全除去用于细胞破碎的溶液或清洗液。用于细胞破碎的溶液所含的离液剂或界面活性剂、清洗液所含的乙醇或异丙醇等药剂阻碍PCR法等后续的酶反应。因此，期望尽量除去，但由于排除后也使用相同的反应容器，存在残存液被带入下一个工序的问题。另外，为了使除去效率更好，还会引起磁珠也被排除之类的问题。

为了解决该问题，提出了在反应容器的外侧配置用于捕获磁珠的磁铁的方法、在用于吸引液体的管的外侧配置磁铁的方法、在反应容器的内侧配置由罩覆盖的集磁结构且捕获磁珠，使磁力体向其他反应容器移动，通过遮蔽磁力或使磁力变弱使磁珠向新的反应容器移动，实质上进行溶液的更换的方法(专利文献2)。

在作为检查物质从生物学试样提取的核酸多的情况下，为了在增幅反应后进行检测，要求核酸提取工序中的试样间的混合极低。在现有的核酸提取自动化装置中，由于反应容器开口，并且在使吸附了试样的磁珠在容器间移动时没有遮蔽物，因此存在无法排除混合的可能性的问题。

本发明的目的在于提供减少了架设在同一装置内的核酸提取用试样的混合的可能性的核酸提取用成套工具及核酸提取装置。

用于解决课题的方法