[发明专利]用于制备抗体缀合物的新方法以及新的抗体缀合物

权利要求书

1.一种用于制备抗体缀合物的方法，包括以下步骤：使具有单个重链间二硫键的改造抗体与缀合试剂反应，所述缀合试剂在来自二硫键的两个半胱氨酸残基之间形成桥接。

2.权利要求1的方法，其中所述抗体是IgG1或IgG4分子。

3.权利要求1或2的方法，其中所述抗体是通过重组表达或化学合成制备。

4.权利要求3的方法，其包括：

a)使编码亲本抗体的核酸序列突变，其中所述突变导致一个或多个重链间半胱氨酸残基被缺失或被非半胱氨酸的氨基酸置换。

b)在表达系统中表达所述核酸；和

c)分离经改造的抗体。

5.权利要求4的方法，其中进行定点诱变以将核苷酸变化纳入所述亲本抗体的编码序列。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述单个重链间二硫键位于所述抗体的根据EU-索引编号系统的第226或229位。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体在根据EU-索引编号系统的第226位具有半胱氨酸并在第229位具有非半胱氨酸的氨基酸，或者在根据EU-索引编号系统的第226位具有非半胱氨酸的氨基酸并在第229位具有半胱氨酸。

8.权利要求7的方法，其中所述非半胱氨酸的氨基酸不包括巯基部分，例如丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸或异亮氨酸、其他极性氨基酸、其他天然存在的氨基酸、或非天然存在的氨基酸。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体在根据EU-索引编号系统的第226位具有半胱氨酸并在第229位具有丝氨酸，或者在根据EU-索引编号系统的第226位具有丝氨酸并在第229位具有半胱氨酸。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体是IgG1分子并在根据EU-索引编号系统的第226-229位包含序列Cys-Pro-Pro-Ser或Ser-Pro-Pro-Cys；或者，所述抗体是IgG4分子并在根据EU-索引编号系统的第226-229位包含序列Cys-Pro-Ser-Ser或Ser-Pro-Ser-Cys。

11.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述单个重链间二硫键位于所述抗体的铰链区中与亲本抗体中的二硫键不同的位置。

12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述试剂包括诊断、治疗或标记试剂、或者能够结合诊断、治疗或标记试剂的结合试剂。

13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述试剂包括聚合物。

14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述试剂包含以下官能团：

其中W代表吸电子基团；A代表C_1-5亚烷基或亚烯基链；B代表一个键或C_1-4亚烷基或亚烯基链；且每个L独立地代表离去基团。