[发明专利]用于定量肿瘤组织中的免疫细胞的方法及其应用

说明书

发明领域

本发明涉及用于定量肿瘤组织中的免疫细胞的方法及其应用。

背景技术

EP-A-EP1943520和WO2007045996描述了用于预后患者的癌症的进展和/或存活，和/或预测对治疗(化疗、放疗、生物治疗、免疫治疗)的响应的体外方法，所述方法包括以下步骤：

a)在来自所述患者的肿瘤组织样品中定量至少一种指示所述患者的局部适应性免疫反应的状态的生物标志物；和

b)比较步骤a)获得的所述至少一种生物标志物的值与相同生物标志物的预定参考值；所述预定参考值与所述患者的所述癌症的进展或存活的特定预后或治疗响应(诸如化疗、放疗、生物治疗、免疫治疗)的预测相关联以预期“良好响应者”vs“差响应者”。

肿瘤组织样品可以选自(i)总体原发肿瘤(作为整体)，(ii)来自肿瘤的组织样品，(iii)来自直接包围肿瘤的组织的组织样品，所述组织选可以更具体地称为肿瘤的“侵入性边缘”，(iv)与肿瘤密切接近的淋巴岛，(v)位于肿瘤最接近处的淋巴结，(vi)手术之前进行的肿瘤活检，和(vii)远处转移。

优选在步骤a)中在从肿瘤的两个区域(分别为(i)肿瘤(CT)和(ii)肿瘤的侵入性边缘(IM))收集的肿瘤样品中定量生物标志物。

在组织微阵列(TMA)上实施上述方法。然而，所述方法的大多数步骤手动执行，且可能观察到测量的可重复性的问题。例如，基于苏木精-伊红复染检查，可以发生病理学家之间选择肿瘤区域以打孔的差异。另外，观察到准确地打孔病理学家观察到的区域的困难。此类典型错误可以发生在每一个步骤。尽管这些文献中描述的方法使得可能获得用于预测癌症患者的存活的高性能，但研究仍继续至具有甚至更好品质的方法，特别是关于自动化再现性和结果的可比性。

如Halama等人在Quantification of prognostic immune cell markers in colorectal cancer using whole slide imagining tumour maps,analytical and quantitative cytology and histology,Vol.32,6,Dec 2010,pp.333-340中所强调，使用组织微阵列(TMA)采样组织学探针在目标分子的空间异质性(如癌组织中经常观察到)的情况下是特别成问题的。Halama等人提出全组织切片显微镜用于数据采集。然而，该研究没有证明产生能够解释肿瘤的空间异质性的参数的特定诊断方法。他的结论是，直到生成该诊断方法并进行后续研究，他不知道肿瘤图谱是否将在单个患者中具有预后价值。

发明简述

现在，本申请人已经发现用于评估肿瘤组织中免疫细胞的数量或密度、用于获得患有癌症的患者的免疫评分(或免疫评分)的方法。

已经以令人惊讶和意料之外的方式注意到，用于评估肿瘤组织中免疫细胞的数量或密度的新方法的使用确保了WO2007045996中描述方法的自动化、可重复性和再现性，并且因此提供了用于预测癌症患者的存活率和治疗响应的实验室间测试的标准测试方法。

当与EP-A-EP1943520和WO2007045996的方法相比时，新方法具有特别较少的可重复性和再现性的问题。

优选实施方案的描述

因此，本申请的主题是用于评估肿瘤组织中免疫细胞的数量或密度的方法，所述方法包括由以下组成的步骤：

a.提供通过使用特异性结合由免疫细胞表达的抗原的抗体的自动化载片染色系统获得的一片或多片免疫染色的组织切片。

b.通过高分辨率扫描捕获进行到步骤a.的载片的数字化，由此获得待分析载片的高清晰度(4.6μm/像素或更好)数字图像，

c.检测数字图像上该片组织切片

d.分析组织切片，用于定义(i)肿瘤(CT)和(ii)肿瘤的侵入性边缘(IM)，

e.提供尺寸参考网格，其中均匀分布单元具有相同表面，所述网格适于待分析肿瘤的尺寸，

f.检测和定量每个单元的染色细胞，由此评估每个单元染色的免疫细胞的数量或密度。