[发明专利]选择性核酸片段回收

权利要求书

1.一种选择性地回收具有所需尺寸范围的核酸片段的方法，其包括：

a)将目标核酸与具有选定pH和盐浓度的结合缓冲液混合以允许具有所述所需尺寸范围的所述核酸片段结合到固体表面，其中所述结合缓冲液包含终浓度介于0.7-0.8M之间的硫氰酸胍(GITC)，所述核酸片段的所述所需尺寸范围是小于或等于700bp；

b)将来自步骤a)的混合物施加到所述固体表面以使得具有所述所需尺寸范围的所述核酸片段可逆地并且非特异性地结合到所述固体表面；以及

c)通过用洗脱缓冲液从所述固体表面洗脱所述结合的核酸片段来选择性地回收具有所述所需尺寸范围的所述核酸片段。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述结合缓冲液的所述离液盐浓度是用一定量的水来调节，这允许具有所述所需尺寸范围的所述核酸片段结合到所述固体表面并且随后从所述固体表面洗脱。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述固体表面是二氧化硅膜滤柱或二氧化硅涂布的磁性微粒。

4.如权利要求1或3所述的方法，其中所述核酸片段是DNA片段、RNA片段或PNA片段。

5.如权利要求4所述的方法，其中当所述结合缓冲液中GITC的最终浓度为约0.8M时，具有小于或等于200bp的所需尺寸范围的DNA片段结合到二氧化硅膜滤柱并且随后从二氧化硅膜滤柱洗脱。

6.如权利要求4所述的方法，其中当GITC的最终浓度为约0.7M时，具有小于或等于300bp的所需尺寸范围的DNA片段结合到二氧化硅膜滤柱并且随后从二氧化硅膜滤柱洗脱。

7.一种选择性地回收具有所需尺寸范围的核酸片段的方法，其包括：

a)通过将目标核酸与第一结合缓冲液混合来提供第一样品混合物，其中所述第一结合缓冲液的盐浓度或pH经过调节以允许较大的核酸片段结合到固体表面；

b)将来自步骤a)的所述第一样品混合物施加到第一固体表面；

c)收集从所述第一固体表面与所述第一样品混合物离心而得的流通溶液；

d)通过将所述流通溶液与第二结合缓冲液混合来提供第二样品混合物，其中所述第二结合缓冲液的盐浓度或pH经过调节以允许具有较小的所需尺寸范围的核酸片段结合到固体表面，其中所述第二结合缓冲液包含终浓度介于0.7-0.8M之间的硫氰酸胍(GITC)，所述核酸片段的所述较小的所需尺寸范围是小于或等于700bp；

e)将来自步骤d)的所述第二样品混合物施加到第二固体表面；以及

f)通过用洗脱缓冲液从所述第二固体表面独立地洗脱所述结合的核酸片段来选择性地回收具有所述较小的所需尺寸范围的所述核酸片段。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述第一结合缓冲液包含选自由以下组成的群组的离液盐：浓度介于0.8-5.0M之间的盐酸胍(GHCl)、浓度介于0.8-5.0M之间的硫氰酸胍(GITC)、浓度介于0.8-7.0M之间的碘化钠(NaI)，以及浓度介于1.0-7.0M之间的高氯酸钠。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述第一结合缓冲液包含酸或其酸性盐，以降低所述结合缓冲液的pH以便促进较大的核酸片段结合到所述固体表面。

10.如权利要求7所述的方法，其中所述第二结合缓冲液包含碱或其碱性盐，以提高所述结合缓冲液的pH以便去除较小的核酸片段。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述结合缓冲液的pH范围介于5.5与7.5之间。

12.一种用于核酸片段选择与回收的试剂盒，其包含：

a)用于核酸片段选择性地结合到固相的一种或多种结合缓冲液，其中至少一种所述结合缓冲液包含终浓度介于0.7-0.8M之间的硫氰酸胍(GITC)以允许具有较小的所需尺寸范围的核酸片段结合到固体表面，所述核酸片段的所述较小的所需尺寸范围是小于或等于700bp；

b)涂布有官能团的一种或多种固相；

c)用于核酸纯化与回收的其它试剂；以及

d)提供用于核酸片段选择与回收的方案的说明书。

13.如权利要求12所述的试剂盒，其中所述固相是二氧化硅膜滤柱或二氧化硅涂布的磁性微粒。

14.如权利要求12所述的试剂盒，其中所述用于核酸纯化与回收的试剂包含洗涤缓冲液、洗脱缓冲液或水。