[发明专利]通过RNA原位杂交检测免疫球蛋白轻链限制性

说明书

本申请主张2013年3月15日提交的美国申请序列号No.13/843408的优先权，和2012年4月5日提交的美国临时申请序列号No.61/620634的优先权，和2012年10月22日提交的美国临时申请序列号No.61/717064的优先权，它们中的每一篇的全部内容作为参考并入本文。

本发明是在国家癌症学会(National Cancer Institute)授予的基金号R43CA168019的政府支持下进行的。政府对本发明具有一定的权利。

背景技术

本发明总体上涉及原位杂交测定，并且更具体地涉及用于诊断B细胞肿瘤的测定。

免疫球蛋白由两条重链和两条轻链组成。在B细胞分化期间，编码免疫球蛋白基因的DNA经历重排以产生个体免疫系统可用的具有较大多样性的可能免疫球蛋白的免疫球蛋白域的独特组合。每种成熟B细胞表达不同的免疫球蛋白域的组合。存在两类轻链，分别表示为κ和λ。在B细胞成熟期间，所发生的DNA重排导致每种成熟B细胞表达具有κ轻链或λ轻链中任一种的免疫球蛋白。因此，在给定分化的B细胞中，B细胞将表达κ轻链或λ链中的一种。在正常哺乳动物生物体中，所述生物体将具有单独表达κ或λ轻链中一种的B细胞群体，但是作为群体，其将具有κ和λ轻链表达细胞的混合。这种细胞群体被认为是多克隆的。

赘生性细胞的特征在于无限制的细胞生长。就B细胞肿瘤来说，肿瘤B细胞的无限制细胞生长导致产生了包括相同细胞多个拷贝的群体B细胞。由于成熟B细胞通常表达κ或λ轻链中的一种，因此肿瘤B细胞群体将显示出相同细胞的多种拷贝的特征，以及因此仅表达κ链或仅表达λ轻链的细胞的多种拷贝的特征。这种含有相同细胞的多个拷贝的群体被认为是克隆的，并且克隆性的特征在于赘生性细胞的异常细胞生长。

因此，克隆性扩增(clonal expansion)是B细胞恶性肿瘤的标志之一，并且最常表示为免疫球蛋白(Ig)轻链(κ或λ中的任一种)的限制性表达(Cook,“Molecular Hematopathology,”Tubbs&Stoler主编，Cell and Tissue Based Molecular Pathology,Churchill Livingstone Elsevier(2008))。Ig轻链限制性(LCR)的临床实验室检测是分化诊断(包括淋巴增生、非典型淋巴增生、慢性炎症和B细胞肿瘤)中有帮助的辅助工具(Cook，如上，2008；Taylor,Applied Immunohistochem.Mol.Morphology 17:470–482(2009a)；Taylor,Applied Immunohistochem.Mol.Morphology 17:366–374(2009b))。

通过免疫组织化学和常规显色原位杂交(CISH)的LCR鉴定对于表达大量κ或λmRNA和细胞质免疫球蛋白的B细胞肿瘤来说是可行的(Beck等人，Diagnostic Mol.Pathol.12:14–20(2003))。在福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)组织中，浆细胞骨髓瘤LCR几乎总是可行的。但是仅非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的罕见亚型(少数具有大量Ig mRNA和蛋白质表达)是通过这些传统方法可评价的(Beck等人，如上，2003)。相反，在所有NHL亚型的绝大部分中，放射自显影原位杂交足够灵敏以检测极低水平的轻链mRNA(Segal等人，Diagnostic Mol.Pathol.:Am.J.Surg.Pathol.,part B,3:170–177(1994)，所述亚型包括最常见的NHL变体-滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、小B淋巴细胞性淋巴瘤和MALT型结外边缘区淋巴瘤。但是，放射自显影信号需要两周或更长时间来显影(Segal等人，如上，1994)，对于临床控制来说，这种延迟是不可接受的。

因此，需要用于良性和癌性B细胞样品鉴定的精确并且快速的测定。本发明满足了这种需要并且也提供了相关优势。

发明概述