[发明专利]靶向/免疫调节性融合蛋白及其制造方法

说明书

与相关申请的交叉引用

本申请要求2012年4月30日提交的印度专利申请号1689/CHE/2012和2012年4月30日提交的印度专利申请号1690/CHE/2012的优先权，两者的内容为所有目的特此通过参考并入本文。

发明背景

技术领域

本发明总的来说涉及产生在癌症疗法中使用的融合蛋白的领域，更具体来说，涉及编码所述融合蛋白的核苷酸序列，其中所述融合或嵌合多肽包含至少一个靶向组成部分和至少一个抵消癌细胞的免疫耐受性的免疫调节组成部分。

相关技术

免疫系统为人体提供了识别和保护自己抵御微生物和被认为是外来的或潜在有害的物质的手段。尽管使用单克隆抗体和T细胞的被动转移以攻击肿瘤细胞的被动免疫疗法已被证明在临床上有效，但诱导这些免疫效应物并建立针对肿瘤细胞的免疫记忆的主动治疗性疫苗接种的目标仍具有挑战性。已经鉴定了几种肿瘤特异性和肿瘤相关抗原，但这些抗原总体上免疫原性弱，并且肿瘤利用多样化的机制产生致耐受性的环境，允许它们避开免疫攻击。克服这样的免疫耐受性并激活稳定水平的抗体和/或T细胞应答的策略，是有效的癌症免疫疗法的关键所在。更重要的是，需要探索个体蛋白和如何产生具有活性三级结构的有活性的嵌合多肽。

发明概述

本发明提供了在癌细胞中表达的多核苷酸以及由其编码的多肽。这些多核苷酸和表达的多肽可用于各种癌症治疗的治疗性方法中。本发明还提供了通过抵消癌细胞的免疫耐受性来减少癌细胞生长的方法，其中T细胞仍具有活性，并抑制已知抑制免疫系统对肿瘤的应答的调节性T细胞的召集。因此，通过本发明的多核苷酸序列产生的嵌合多肽，由于所述表达的融合或嵌合多肽，可用于治疗癌症。

一方面，本发明提供了嵌合的多肽，其含有至少一个用于靶向癌细胞的靶向组成部分以及至少一个抵消癌细胞的免疫耐受性的免疫调节组成部分，其中所述靶向组成部分和免疫调节组成部分通过具有足够氨基酸残基长度的氨基酸间隔物相连，使得两个组成部分能够成功地与它们各自的靶点结合。在可替选方式中，所述靶向组成部分和所述抵消癌细胞的免疫耐受性的免疫调节组成部分可以彼此直接结合。本发明的嵌合/融合多肽可用于结合到癌细胞受体并降低癌细胞避开免疫应答的能力。

本发明是基于通过编码所述抵消或逆转癌细胞的免疫耐受性的融合蛋白的多核苷酸的表达来制备嵌合/融合蛋白。癌细胞在肿瘤微环境中能够通过特定免疫抑制机制逃避被化疗药剂或肿瘤靶向抗体的消除，癌细胞的这种能力被称为免疫耐受性。这样的免疫抑制机制包括免疫抑制性细胞因子(例如转化生长因子β(TGF-β))和调节性T细胞和/或免疫抑制性髓样树突状细胞(DC)。通过抵消肿瘤诱导的免疫耐受性，本发明提供了用于癌症治疗的有效组合物和方法，其任选地与另一种现有的癌症治疗相组合。本发明提供了通过激活并放大T细胞介导的针对有抗性或弥散性癌细胞的适应性抗肿瘤效应，来抵消肿瘤诱导的免疫耐受性并增强化疗的抗肿瘤效能的策略。

另一方面，本发明提供了包括与至少一个免疫调节组成部分融合的至少一个靶向组成部分的分子。靶向组成部分特异性结合靶分子，免疫调节组成部分特异性结合下列分子之一：(i)转化生长因子-β(TGF-β)；(ii)程序化死亡-1配体1(PD-L1)或程序化死亡-1配体2(PD-L2)；(iii)核因子KB的受体激活剂(RANK)配体(RANKL)；(iv)转化生长因子-β受体(TGF-pR)；(v)程序化死亡-1(PD-1)；(vi)4-1BB受体或(vii)核因子κΒ的受体激活剂(RANK)。

另一方面，所述靶向组成部分包括特异性结合肿瘤细胞、肿瘤抗原、肿瘤脉管系统、肿瘤微环境或肿瘤浸润的免疫细胞的组分的抗体、抗体片段包括抗体的轻链或重链、scFv或含Fc多肽。优选地，靶向组成部分是对肿瘤细胞上的组分具有结合亲和性的抗体或其片段。值得注意的是，每个重链和轻链可以个别地连接到分开和不同的免疫调节组成部分。此外，抗体靶向组成部分的重链或轻链可以连接到免疫调节组成部分，所述免疫调节组成部分进而可以进一步连接到第二免疫调节组成部分，其中在两个免疫调节组成部分之间存在连接物。