[发明专利]用于生产抗体检测试剂的方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及用于生产抗体检测试剂的方法。本发明还涉及由所述方法生产的抗体检测试剂及其用途。

背景技术

存在大量用于检测包含在液体样品中的抗体的方法，例如放射性免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISA)。ELISA是这样的方法，涉及：在微平板上固定特定的抗原；在连续稀释含有抗体的样品后，在微平板上实施抗原-抗体反应；使用酶标记的第二抗体检测结合的抗体。该方法需要使用独立的测定平板评估针对单个抗原的抗体测试。

作为用于解决该问题的方法，已关注了一种多元技术，该技术可以利用携带报告子荧光的微珠作为固定的载体，同时分析针对多种抗原的抗体。

在任何上述技术的应用中，必须以水溶性的形式制备这些多种抗原。在绝大部分情况下，通常使用可以以水溶性形式制备的天然结构的蛋白质或化学合成的多肽片段。

例如，专利文献1或2中描述了用于检测包含在癌症患者的血液中的抗体的方法。该方法涉及将抗原表位肽(包含若干个氨基酸的抗原肽)固定在珠子上；将珠子与对象的血液组分接触；并检测包含在对象的血液中的抗原表位肽-特异性抗体。然而，抗体所结合的表位部分根据HLA的类型而不同。因此，专利文献1或2中描述的方法的应用需要明确多种条件，如检验对象的HLA类型和鉴别适合对象的HLA类型的表位肽。

为了制备针对特定抗原蛋白质的抗体的检测试剂，待制备的试剂包含源自位于一类珠子表面上的一类抗原蛋白质的所有表位部分，并实施高度灵敏和稳定的检测。出于该目的，优选是获得具有水溶性和柔性结构的抗原。但是，绝大部分的变性蛋白质、溶解性差的蛋白质(例如，膜蛋白)或具有不稳定的物理特性的蛋白质都趋向于聚集。就此而言，在绝大部分情况下，通常使用能够表现出稳定的物理特性的部分肽。

利用这类部分肽需要合成多种重叠的肽用于覆盖所有的表位，并且还需要制备许多类型的珠子。此外，实践上难以提供无缝的表位肽。即使可以幸运的获得具有天然结构的全长抗原，具有内部包埋了疏水部分的高级结构的常规蛋白质并不总是暴露其表位而与抗体反应。

即使在使用溶解的蛋白质制备的抗体检测试剂中，包含在蛋白质中的巯基可以随时间形成二硫键，从而影响抗体检测。

例如，专利文献3描述了利用人丙肝病毒(HCV)的长链多肽，检测包含在对象的血清中的抗HCV抗体的方法。专利文献3陈述了随时间生成的蛋白质内或蛋白质间的二硫键降低了抗体检测的灵敏度。其中描述的解决该问题的方案是在检测前或检测的过程中使用还原剂解离蛋白质内或蛋白质间的二硫键，从而改善抗体检测的灵敏度。由于即使是溶解的蛋白质也可能随时间沉淀，用于解决该问题的方法是必需的。

已知TAPS-磺酸酯(甲烷硫代磺酸三甲基铵基丙基酯；在下文中称为TAPS)是使蛋白质溶解的化合物。TAPS可以结合蛋白质中的巯基，使蛋白质可逆的阳离子化(参见例如，非专利文献1和2)。

阳离子化蛋白表现出改善的水溶性。因为TAPS与蛋白质的结合是可逆的反应，已知在细胞摄入后，TAPS与蛋白质解离，从而由于重折叠的结果，使蛋白质能够执行其最初的功能。然而，迄今为止尚无尝试利用TAPS溶解来制备抗体检测试剂的方法。此外，一般已知抗体结合糖基化蛋白质。但是，之前没有报道显示抗体是否能够结合与人工合成的化合物，如TAPS结合的蛋白质。

引用列表

专利文献

专利文献1：日本专利号3960614(Immunodia Co.,Ltd.)

专利文献2：JP 2005-098877 A(Hitachi Software Engineering Co.,Ltd.)

专利文献3：日本专利号3225468(Dainabot Co.,Ltd.)

非专利文献

非专利文献1：M.Seno等人，Growth Factors,15,215-229(1998)

非专利文献2：M.Inoue等人，Biotechnol.Appl.Biochem.,28,207-213(1998)

发明概述

技术问题

本发明是在上述背景下产生的。本发明提供了用于有效生产检测存在于液体样品中的抗体的试剂的方法，所述抗体特异的结合溶解性差的抗原蛋白质。本发明还提供了由所述生产方法生产的抗体检测试剂及其用途。

要解决的问题

具体而言，本发明的目标是提供以下方面：