[发明专利]中和RSV、MPV和PVM的抗体和其应用

说明书

该申请要求2012年3月20日提交的美国临时申请号61/613,197和2012年6月4日提交的美国临时申请号61/655,310的权益，其公开内容以其全部在此通过引用被并入，如同记载在本文中。

发明背景

小鼠呼吸道合胞病毒(RSV)和变性肺病毒(MPV)和肺炎病毒是常见的属于副粘病毒(paramyxovirus)家族的感冒病毒，其共享目标群体和代表新生儿和免疫受损的患者中主要的健康问题。

RSV是全球婴儿和成人呼吸道疾病的主要原因。具有RSV感染的儿童的0.5％和3.2％需要住院(Thompson,W.W.et al.,2003,JAMA:The Journal of the American Medical Association 289:179-186)，并且儿童的5％至10％具有延长的严重感染，认为是以后童年里易感染哮鸣和哮喘样症状的一个因素。对RSV的免疫似乎是短暂的，因此再感染频繁(Ogra,2003,Paediatric Respiratory Reviews 5Suppl A:S119-126)。

人MPV在2001年被首次分离，并且现在被公认为是婴儿和成人中急性呼吸道疾病的第二主要原因；据估计它感染超过50％的两岁婴儿和几乎所有五岁的儿童。MPV占住院的幼儿中呼吸性疾病的大致5至15％(Alto,2004,The Journal of the American Board of Family Practice/American Board of Family Practice 17:466-469；Williams et al.,2004,N Engl J Med 350:443-450)。具有MPV的感染是濒临危险的早产儿中的疾病、早产的慢性肺病、充血性心脏病和免疫缺陷的显著负担(Martino et al.,2005,Biology of Blood and Marrow Transplantation:Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation 11:781-796)。

MPV和RSV的共感染可以是常见的，假定它们的流行和重叠的冬季疾病流行。虽然不清楚是否协同的病理学可在这两种病毒之间发生，但是导致特别严重的呼吸道疾病的恶化在一些MPV和RSV共感染的儿童中观察到(Greensill,2003,Emerging Infectious Diseases 9:372)。

RSV——其属于肺病毒属(Pneumoviriniae)亚科肺炎病毒(Pneumovirus)属，以及MPV——其属于肺病毒属亚科变性肺病毒(Metapneumovirus)属，在它们的基因结构中具有一些相似性，虽然MPV缺少在RSV中发现的非结构基因NS1和NS2。RSV和MPV包膜含有三个病毒编码的跨膜表面糖蛋白：主要附着蛋白G、融合蛋白F和小的疏水SH蛋白。虽然RSV和MPV包膜含有功能上相似的蛋白，然而，重要的是注意RSV和MPV的F蛋白只共享33％的氨基酸序列同一性。另外，针对RSV或MPV产生的抗血清不交叉中和两种病毒(Wyde et al.,2003,Antiviral Research 60:51-59)，并且到目前为止能交叉中和RSV和MPV的单克隆抗体没有被分离。

RSV和MPV F糖蛋白通过病毒粒子包膜和宿主细胞质膜之间的融合来指导病毒穿入。后来在感染中，细胞表面上表达的F蛋白可用邻近细胞介导融合，形成合胞体(Collins et al.,1984PNAS 81:7683-7687)。在两种情况中，溶蛋白性裂解和含有氨基酸的疏水伸展的F亚基——称作融合肽——的N-端直接插入靶细胞膜以启动融合。结合到靶细胞和随后的活化之后，相对稳定的融合前F蛋白经历一系列结构重排，其导致融合肽插入靶细胞膜，之后是当病毒和细胞膜放在附近时形成的稳定的螺旋束的形成。这些结构变化导致稳定的融合后F蛋白的形成。