[发明专利]使用合成的信使RNA无饲养细胞地衍生人类诱导性多能干细胞

权利要求书

1.一种用于去分化或重编程无饲养细胞、无外来物且无整合的哺乳动物体细胞的方法，所述方法包括：

a)用补充有以下组合物的培养基转染分离的哺乳动物体细胞，所述组合物包含：1)有效量的编码M₃O的合成的mRNA，以及2)编码Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA；并且

b)在无饲养细胞和无外来物的培养条件下培养所述体细胞足够长的时间，并且每天重复步骤a)一次直到将所述体细胞重编程或去分化，产生无饲养细胞、无外来物且无整合的诱导的多能干细胞。

2.一种用于去分化或重编程无饲养细胞、无外来物且无整合的哺乳动物体细胞的方法，所述方法包括：

a.在培养基中将所述哺乳动物体细胞以一细胞密度铺板，所述细胞密度等同于标准6孔组织培养板的每个孔50,000至150,000个细胞，并在无饲养细胞、无外来物且无整合的条件下培养；

b.在铺板后一天，通过将步骤a的培养基换成新鲜培养基来转染细胞，所述新鲜培养基补充有包含以下的组合物：1)有效量的编码M₃O的合成的mRNA，以及2)编码Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA，并且在无饲养细胞和无外来物的培养条件下培养所述分离的哺乳动物体细胞；

c.重复步骤b足够多的次数，由此将所述体细胞重编程或去分化，产生无饲养细胞、无外来物且无整合的诱导的多能干细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述哺乳动物体细胞是人类细胞。

4.一种用于去分化或重编程无饲养细胞、无外来物且无整合的哺乳动物体细胞的方法，所述方法包括：

a.在无饲养细胞和无外来物的培养条件下在培养基中培养分离的哺乳动物体细胞，所述培养基补充有包含以下的组合物：1)有效量的编码M₃O的合成的mRNA，以及2)编码Sox2、Klf4、Nanog、Lin28和cMyc-T58A的合成的mRNA；

b.在24小时后将步骤a的培养基换成新鲜培养基，所述新鲜培养基补充有所述组合物，并且在无饲养细胞和无外来物的培养条件下培养所述分离的哺乳动物体细胞；

c.重复步骤b足够多的次数，由此将所述体细胞重编程或去分化，产生无饲养细胞、无外来物且无整合的诱导的多能干细胞。

5.一种制备药剂的方法，所述药剂用于在患者中治疗或抑制疾病或障碍的一种或多种症状，所述方法包括：

使用权利要求1、2或4的方法以获得所述诱导的多能干细胞；以及

使用所获得的诱导的多能干细胞制备药剂。