[发明专利]毒肽产生、植物中的肽表达和富含半胱氨酸的肽的组合

权利要求书

1.一种包含与富含半胱氨酸的杀虫蛋白(CRIP)例如抑制物半胱氨酸结(ICK)基序蛋白有效连接的内质网信号肽(ERSP)的蛋白质，其中所述ERSP是所述蛋白质(ERSP-ICK)的N端。

2.权利要求1的肽，其中所述ERSP是将表达的CRIP导向植物细胞的内质网的任何信号肽。

3.权利要求2的肽，其中所述CRIP是抑制物半胱氨酸结(ICK)蛋白。

4.权利要求2的肽，其中所述CRIP是非ICK蛋白。

5.权利要求2的肽，其中所述ERSP是来源于植物的长度为5-50个氨基酸的肽。

6.一种与翻译稳定性蛋白(STA)有效连接的权利要求1的肽，其中所述ERSP是所述蛋白质的N端，翻译稳定性蛋白(STA)可在任选为ICK基序蛋白(ERSP-STA-ICK)或非ICK基序蛋白(ERSP-STA-非ICK)的CRIP的N端一侧；或者在ICK或非ICK基序蛋白(ERSP-ICK-STA)或(ERSP-非ICK-STA)的C端一侧。

7.一种具有添加至已知肽并与所述已知肽有效连接的N端二肽的肽，其中所述N端二肽由二肽N端的一个非极性氨基酸和二肽C端的一个极性氨基酸组成，其中所述肽选自CRIP (富含半胱氨酸的杀虫肽)，例如选自ICK肽或非ICK肽。

8.一种具有添加至已知肽并与所述已知肽有效连接的N端二肽的权利要求7的肽，其中所述N端二肽由二肽N端的一个非极性氨基酸和二肽C端的一个极性氨基酸组成。

9.权利要求8的肽，其中所述来自N端二肽的N端氨基酸的非极性氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸。

10.权利要求8的肽，所述N端肽的C端氨基酸的极性氨基酸选自丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、色氨酸、酪氨酸。

11.权利要求8的肽，其中所述来自N端二肽的N端氨基酸的非极性氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸，所述N端肽的C端氨基酸的极性氨基酸选自丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、色氨酸、酪氨酸。

12.权利要求11的肽，其中所述二肽由甘氨酸-丝氨酸组成。

13.一种包含至少两种类型的杀虫蛋白或肽的组合物，其中一种类型是成孔杀虫蛋白(PFIP)，另一种类型是富含半胱氨酸的杀虫肽(CRIP)。

14.权利要求13的组合物，其中所述CRIP是ICK，任选所述ICK源自于或来源于Hadronyche versuta或布鲁山脉漏斗网蜘蛛、Atrax robustus、Atrax formidabilis、Atrax infensus，包括称为U-ACTX多肽、U-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1a、rU-ACTX-Hv1b的毒素或突变体或变体。

15.权利要求14的组合物，其中所述CRIP是非ICK CRIP，任选所述非ICK CRIP源自于或来源于具有非ICK CRIPS的动物，例如海葵、海胆和海蛤蝓，任选包括名为Anemonia viridi的海葵，任选包括名为Av2和Av3的肽，尤其类似于Av2和Av3的肽，包括序列表所列出的这类肽或突变体或变体。

16.一种使用权利要求13的组合物控制Bt抗性昆虫的方法，所述方法包括产生至少两种类型的肽的组合物，其中一种类型的肽是成孔杀虫蛋白(PFIP)，另一种类型的肽是富含半胱氨酸的杀虫肽(CRIP)，且PFIP和CRIP蛋白选自权利要求1和本文描述的任何组合物和序列表提供的任何蛋白质；然后将所述组合物施用于昆虫所在地。

17.一种包括保护植物免遭Bt抗性昆虫在内的控制Bt抗性昆虫的权利要求16的方法，所述方法包括产生表达至少两种正确折叠的肽的组合的植物，其中一种类型的肽是成孔杀虫蛋白(PFIP)，另一种类型的肽是富含半胱氨酸的杀虫肽(CRIP)，且PFIP和CRIP蛋白选自本文所述的任何组合物和选自序列表提供的任何蛋白质。