[发明专利]多肽表达方法

权利要求书

1.一种在宿主细胞生产目标多肽的方法，所述方法包括：

a.提供载有编码目标多肽的核酸的宿主细胞，其中目标多肽经修饰使得其相比参考多肽包含较少的甲硫氨酸残基和/或赖氨酸残基，位于所述多肽序列的N-末端的任何起始甲硫氨酸氨基酸除外，其中所述修饰是通过将参考多肽中的甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸用非甲硫氨酸和赖氨酸的氨基酸替换来实现的，并且其中所述修饰发生在成熟多肽骨架中；

b.在适合生产多肽的条件下培养宿主细胞；以及任选地，

c.回收目标化合物，

其中所述目标多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的数目相比参考多肽减少至少25％，其中所述宿主细胞是丝状真菌细胞，其中所述参考多肽是期望增加其在宿主细胞中的表达的多肽，其中使得所述目标多肽在细胞外培养基中的活性增加至少5％，其中所述目标多肽的比活性水平与参考多肽的比活性水平相差小于15％，其中所述目标多肽是酶。

2.根据权利要求1的方法，其中所述参考多肽是对应的野生型多肽。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述参考多肽是与一个或更多个对应的野生型多肽有至少70％同一性的多肽序列。

4.根据权利要求1或2的方法，其中所述参考多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸数目被确定为两个或更多个参考多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的平均数目。

5.根据权利要求1或2的方法，其中所述目标多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸相比于参考多肽的减少在至少80个或更多个连续氨基酸的长度上被确定。

6.根据权利要求1或2的方法，其中所述目标多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸相比于参考多肽的减少的确定不考虑在宿主细胞中被加工的信号序列。

7.根据权利要求1或2的方法，其中所述目标多肽是被分泌的蛋白质。

8.一种改进多肽在宿主细胞中的表达水平的方法，所述方法包括相比参考多肽减少所述多肽的甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的数目，位于所述多肽序列的N-末端的任何起始甲硫氨酸氨基酸除外，其中所述多肽的氨基酸骨架中的甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的数目减少至少25％，其中所述数目减少是通过将参考多肽中的甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸用非甲硫氨酸和赖氨酸的氨基酸替换来实现的，并且其中所述替换发生在成熟多肽骨架中，其中所述宿主细胞是丝状真菌细胞，其中所述参考多肽是期望增加其在宿主细胞中的表达的多肽，其中使得所述多肽在细胞外培养基中的活性增加至少5％，其中所述多肽的比活性的水平与参考多肽的比活性水平相差小于15％，其中所述多肽是酶。

9.根据权利要求8的方法，其中所述参考多肽是对应的野生型多肽。

10.根据权利要求8的方法，其中所述参考多肽是与一个或更多个对应的野生型多肽有至少70％的同一性的多肽序列。

11.根据权利要求8的方法，其中所述参考多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的数目被确定为两个或更多个参考多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的平均数目。

12.根据权利要求8的方法，其中所述多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸相比于参考多肽的减少在至少80个或更多个连续氨基酸的长度上被确定。

13.根据权利要求8的方法，其中所述甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸的数目相比参考多肽被减少至少30％。

14.根据权利要求8的方法，其中所述多肽中甲硫氨酸和/或赖氨酸氨基酸相比于参考多肽的减少的确定不考虑在宿主细胞中被加工的信号序列。