[发明专利]用于心血管疾病和其它病况的旁分泌基因的全身性递送和受调节的表达

说明书

关于对根据联邦政府资助的研究作出的本发明的权利的声明

本发明是在政府支持下根据国家卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)的DHHS授予的拨款号HL088426作出的。政府拥有本发明的某些权利。

技术领域

本发明涉及细胞和分子生物学以及医学。本发明提供了组合物以及体外和离体方法。在替代性实施方案中，本发明提供了用于治疗、改善或防止(预防)个体或患者的对体内升高或持续的旁分泌多肽水平有反应的疾病、感染或病况的方法，所述方法包括：提供可操作地连接到转录调节序列的编码旁分泌多肽的核酸或基因；或其中已含有编码旁分泌的核酸、基因、转录物或信使的表达运载体(vehicle)、载体、重组病毒或等同物，并且所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物能够在细胞中或体内表达所述编码旁分泌的核酸、基因、转录物或信使；以及向有需要的个体或患者施用或递送可操作地连接到转录调节序列的所述编码旁分泌多肽的核酸、基因、转录物或信使，或所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物，从而治疗、改善或防止(预防)所述个体或患者的对升高的旁分泌多肽水平有反应的所述疾病、感染或病况。

背景技术

最近，已显示，静脉内注射编码血友病B中缺乏的人类因子IX的病毒载体使得患有血友病B的受试者的血清中因子IX的浓度升高到降低了所述受试者对外源性因子IX输注的需求的程度。然而：1)这种蛋白质并不处在受调节的表达之下，并且因此，不能够对血清中所述转基因的水平进行最佳的调控；2)这种系统未提供在不希望或出乎意料的作用的情况下关闭转基因表达的手段；以及3)所述基因，即因子IX不是旁分泌基因，并且不具有有益的心血管作用，并且因此，不能用于治疗心脏病。

发明内容

本发明提供了用于治疗、改善或防止(预防)个体或患者的对体内升高的旁分泌多肽水平有反应的任何疾病、感染或病况的方法。在替代性实施方案中，本发明提供了用于治疗、改善或防止(预防)对体内升高或持续的肽或旁分泌多肽水平有反应的疾病、感染或病况的方法，所述方法包括：

(a)(i)提供可操作地连接到转录调节序列的编码旁分泌多肽的核酸或基因；或其中已含有编码旁分泌的核酸或基因或者表达旁分泌多肽的核酸、转录物或信使的表达运载体、载体、重组病毒或等同物，并且所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物能够在细胞中或体内表达所述编码旁分泌的核酸、基因、转录物或信使；以及

(ii)向所述细胞或者有需要的个体或患者施用或递送可操作地连接到转录调节序列的所述编码旁分泌多肽的核酸、基因、转录物或信使、或者所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物，

从而治疗、改善或防止(预防)所述个体或患者的对升高或持续的旁分泌多肽水平有反应的所述疾病、感染或病况；

(b)(a)的方法，其中所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物是或包括：

腺相关病毒(AAV)、慢病毒载体或腺病毒载体，

AAV血清型AAV5、AAV6、AAV8或AAV9，

源自恒河猴的AAV、或源自恒河猴的AAV AAVrh.10hCLN2，

AAV衣壳突变体或AAV杂合体血清型，

嗜器官性AAV、或嗜心性AAV、或嗜心性AAVM41突变体，

其中任选地，将所述AAV工程化以提高靶向对野生型(wt)AAV不许可的特定细胞类型的效率和/或提高仅感染所关注的细胞类型的功效，

并且任选地，通过一种或多种修饰将杂合体AAV重新定向或工程化成杂交体血清型，所述一种或多种修饰包括：1)衣壳转移；2)使双特异性抗体吸附至衣壳表面；3)将镶嵌型衣壳工程化；和/或4)将嵌合型衣壳工程化；

(c)(a)的方法，其中所述编码旁分泌的核酸、基因、转录物或信使被可操作地连接到受调节的或可诱导的转录调节序列；

(d)(c)的方法，其中所述受调节的或可诱导的转录调节序列是受调节的启动子或可诱导的启动子，

其中任选地，转录和/或翻译的正调控因子(激活子)和/或负调控因子(阻遏子)可操作地连接到所述编码旁分泌多肽的核酸、基因、转录物或信使；

(e)(a)至(d)中任一项的方法，其中向有需要的个体或患者施用可操作地连接到转录调节序列的所述编码旁分泌多肽的核酸、基因、转录物或信使、或所述表达运载体、载体、重组病毒或等同物使得旁分泌蛋白被释放到血流或周身循环中，或使得所述旁分泌蛋白在细胞中的表达增加或持续，