[发明专利]以记忆T细胞为主要成分的淋巴细胞群的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及以记忆T细胞为主要成分的淋巴细胞群的大量制造方法、含有所述淋巴细胞群的医药组合物、以及所述淋巴细胞群的制造系统(装置等手段的组合)等，所述大量制造方法为用于简便地大量获得来自含有T细胞的外周血的CD45RO阳性且CD62L阳性的T细胞群、CD45RO阳性且CD62L阴性的T细胞群的方法。

背景技术

淋巴细胞作为支持用于机体防御的免疫系统的重要手段近年来备受关注。淋巴细胞的表面表达有被称作分化抗原的抗原型，淋巴细胞根据该抗原型被分类为各种各样的亚群(subset)。例如，根据单克隆抗体的反应性对有无CD3(CD为分化簇(cluster of differentiation)的略称)表达进行检验，由此将淋巴细胞区别为与细胞免疫相关的T淋巴细胞(CD3阳性，也表示为CD3+；以下有时也将阳性记载为+、阴性记载为-)和与体液免疫相关的B淋巴细胞等(CD3阴性，也表示为CD3-)。而且这些淋巴细胞各自的功能也不同。进一步地，与细胞免疫相关的T淋巴细胞(也称作T细胞)被分类为表达CD4的CD4阳性细胞和表达CD8的CD8阳性细胞。以往，一直认为CD4阳性细胞发挥辅助功能、CD8阳性细胞发挥细胞抑制性功能，因此迄今为止，多数情况下，将CD4阳性细胞和CD8阳性细胞分离之后再进行研究。

通过形态对淋巴细胞进行区别是困难的，多数情况下如上文所述根据抗原型将淋巴细胞分为各亚群并对功能进行分析。但是，其多半是使用与各细胞的抗原型相对应的主要为单克隆抗体(例如抗CD4单克隆抗体、抗CD8单克隆抗体)来进行的。而且，是使淋巴细胞与结合在磁性微珠粒(magnetic microbeads)上的抗体进行反应、从容器外部利用贴附的磁石的磁力收集磁性微珠、分离介由抗体结合在所述珠粒(beads)上的细胞或者利用分离柱来进行分离的方法。此外，为了大量获得CD4阳性细胞、CD8阳性细胞，也有在利用微珠粒法将其各自分离之后，进一步进行活化、扩增培养的方法(参见专利文献2)。此外，近来，由于测定仪器的进步，利用针对各自的表面抗原的荧光标记抗体对淋巴细胞进行染色、使用细胞分选仪(cell sorter)进行分辨的方法也被实施。该方法中，预先用荧光染料对针对细胞表面抗原的抗体进行标记，使标记抗体结合在淋巴细胞上，将该淋巴细胞供给至使用细胞分选仪进行的测定从而检验表面抗原的表达状态，进而对亚群进行分离。但是，该方法存在仅小规模适用的问题(参见非专利文献2)。无论采用以往的何种方法，都无法避免用高价的抗体对淋巴细胞进行标记等繁杂的操作，要获得大量的细胞需要费钱费力。

关于活化T淋巴细胞的制造方法，最初为由Sekine等人进行的报道。这是对选择性地刺激活化T淋巴细胞群的增殖从而获得经增殖的活化T淋巴细胞群的方法的首次报道，具体而言，其中将人外周血淋巴细胞(PBMC：Peripheral Blood Mononuclear Cell)在固相化了OKT3抗体(其为抗CD3抗体之一)的培养烧瓶中进行第一期培养、将经此培养的细胞在不存在OKT3抗体的情况下进行第二期培养。采用该方法获得的活化淋巴细胞群进一步经过在白细胞介素2(IL-2)存在下的培养，可以作为癌症的过继性免疫疗法(adoptive immunotherapy)施予至作为上述外周血采集来源的患者(参见专利文献1)。此外，以同样的方式，将来自供体的外周血淋巴细胞在固相化了OKT3抗体的培养容器中于IL-2存在下进行培养，从获得的活化淋巴细胞群中分离CD4阳性细胞，可以将作为以相对于总细胞而言90％以上的量含有分离得到的CD4阳性细胞的制剂的、用于预防及治疗传染病、肿瘤复发、自身免疫性疾病的医药组合物施予至患者(参见专利文献2)。作为它们的淋巴细胞源，可使用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL：Tumor Infiltrating Lymphocyte)、脐带血、骨髓等(参见专利文献2)。