[发明专利]检测结核的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测个体内结核感染的方法和检测个体是否已接种了抗结核疫苗的方法。

发明背景

结核(TB)是一种由结核分枝杆菌(Mtb)引起的传染疾病^1,2。目前，它是全世界死于传染疾病的其中一个主要原因，因此形成了一个重要公共卫生难题²。尽管TB病例的数量自2006年起在下降，但是800万至1000万感染者中每年估计报告300万死亡病例^1,3。大约20亿人潜伏感染Mtb，并且根据WHO，它在全世界每年引起980万新的病例以及大约180万死亡数^1,3。这个问题随着耐多药(MDR)和广泛耐药(XDR)菌株的出现而更加复杂^2,4。全世界用于诊断TB的最常用方法是痰涂片镜检⁵，但是在一些发达国家可以通过培养法或快速分子试验诊断⁶。考虑到TB的全球流行速度正在增加以及现有疫苗－牛结核杆菌卡介苗－的有限保护，非常需要能够阻止这个公共卫生问题的候选疫苗^7,8。因此，许多研究者正努力开发新的抗Mtb的改进疫苗^4,7。

结核分枝杆菌(Mtb)是由Robert Koch在1881年通过培养碎肉芽肿鉴定的。Mtb是一种耐酸、革兰氏阳性并且生长缓慢的芽孢杆菌，直径和长度分别为0.5μm和1-4μm，使它小于许多细菌⁹。它的蜡质细胞壁由长链脂肪酸组成，其中大多数是分枝菌酸和糖脂例如脂阿拉伯甘露糖(LAM)、酚醛树脂和磷酸糖脂(phosphoglycoloipid)和硫脂。其他细胞壁组份包括肽聚糖和阿拉伯半乳糖¹⁰。细胞壁的特性增强结核分枝杆菌在巨噬细胞内的复制和存留，并且也对在吞噬体内预适应有作用^9,11。Mtb调节抗原递呈和巨噬细胞的杀菌活性的能力使得它成为最成功的人类病原体¹¹。

Mtb是一种需氧病原体，生长于宿主的细胞内区域，因此在氧气供应完全充足的肺组织生长地更好³。它通常感染肺部(肺TB)，但有时也感染其他位置(肺外TB)。该疾病仅仅当肺TB患者通过喷嚏、咳嗽或讲话排出杆菌时在空气中传播⁶。从空气中吸入它们后，传染性结核杆菌通过呼吸道机动进入机体组织。被血液或淋巴液携带至肺尖和淋巴结后，它们接着在这些位置定居³。TB感染的特性和后果主要由宿主和病原体在感染发病时的相互作用决定⁷。在感染的2-6周内淋巴细胞和噬菌体被募集到感染位置，导致肉芽肿的产生，TB感染的标志。所述杆菌存在于肉芽肿内，在那里它们能够在以后被重新激活或当它们的数量上升时被释放至气道³。

结核诊断；可用的方法

症状诊断

增加的死亡数量和TB不断爆发使人们认识提高。如果他们持续咳嗽(超过2周)、发冷、盗汗、厌食、体重减轻、疲劳、胸痛和气喘，他们寻求就诊。肺外TB可能具有像背痛、抽搐、颈部肿块、红眼、排尿困难、脚肿、头晕、不育、关节痛、吞咽困难、排便习惯改变和皮肤溃疡的症状。

培养分析

传统的培养分析方法被用于鉴定病原菌。痰、胃抽出物、来自肺部的液体通过具有清洗步骤的支气管镜检喷射出来，胸膜活检的来自肺部内膜的组织和胸液是用于TB病常见诊断的培养的最常用样品。进行抗酸染色鉴定涂片阳性菌株。通过培养来自可疑者的样品能够获得清晰可辨的Mtb克隆。培养试验灵敏(80％)并具有98％特异性，计有2％错误判读。

结核菌素试验/PPD

结核菌素试验或曼托试验或纯蛋白衍生物(PPD)或Priquette试验是用于TB的常见诊断手段。

在PPD试验中，衍生于结核分枝杆菌的蛋白质被消毒并从培养浓缩物中纯化，在前臂皮下注射。细菌发生史将导致免疫反应，其可通过注射结核菌素(结核杆菌的甘油提取物)后48-72小时内注射位置的膨胀鉴定。测量注射位置的硬化(包埋的坚硬区域)(5mm,10mm或15mm)，如果有免疫反应表示阳性。

HIV阳性的人、器官移植、免疫抑制的患者、有结核分枝杆菌接触史或TB发病史的人和居住在卫生差/不干净区域的人更可能是阳性PPD结果。