[发明专利]高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法

说明书

技术领域

本发明涉及高密度脂蛋白3(以下有时称为“HDL3”)中的胆固醇(以下有时将HDL3中的胆固醇称为“HDL3胆固醇”或“HDL3-C”)的定量方法。

背景技术

高密度脂蛋白(HDL)胆固醇，由于从包括动脉硬化壁的各组织接收胆固醇，与蓄积于细胞内的胆固醇的去除作用相关，因此也被称为胆固醇逆向转运系统。已知与冠状动脉硬化等动脉硬化疾病存在负相关，HDL为低值作为脂质异常症之一而设置低值界限，已知作为动脉硬化的指标是有用的。

HDL由脱辅基蛋白与磷脂、胆固醇、中性脂肪构成。HDL的比重为d=1.063～1.210g/mL，进而分为d=1.063～1.125g/mL的HDL2和d=1.125～1.210g/mL的HDL3这两种级分。通过脂蛋白的分布曲线在d=1.125部分发现缺口，由此开始比重重的部分为HDL3。另外，还存在根据HDL中的脱辅基蛋白中载脂蛋白(apolipoprotein)E含量差，将载脂蛋白E含量多的HDL作为富含载脂蛋白E的 HDL的亚级分的分类方法。

已知不仅迄今为止的HDL蛋白整体，而且在HDL2和HDL3各亚级分中表现出不同的作用。已知临床上由于CETP缺损HDL不会代谢为LDL、IDL，HDL胆固醇量增加。由于CETP缺损而增加了的HDL为HDL2。据称HDL2具有抗动脉硬化作用。另外也据称，由于CETP缺损富含载脂蛋白E的HDL升高，富含载脂蛋白E的 HDL的胆固醇争夺能力强，具有抗血小板作用，据称在HDL中更正面。另外，由于肝脂酶活性的降低HDL3不会变化为HDL2，HDL3增加。暗示了由于HDL3的增加所导致的冠状动脉疾病的发病率的增加。由这些倾向分别测定HDL亚级分预想有助于判断动脉硬化疾病的有无、原因。另外，现在基于这些HDL亚级分的作用，各厂商进行了抑制CETP的作用、减少LDL胆固醇量、增加HDL胆固醇量的治疗药的开发。

确立HDL亚级分的简便的测定方法有可能实现详细的作用的阐明、它们的治疗效果。

迄今为止，作为HDL亚级分的测定方法已知的方法，已知超离心法、高效液相色谱(HPLC)法、HDL3沉淀法(专利文献1)、NMR法等。

超离心为通过离心、利用脂蛋白的比重之差来分级的方法，存在下述缺点：作业需要熟练、花费很多天数、或者费用昂贵。冈崎等人提出的利用HPLC来分开HDL2和HDL3的方法中，作业需要时间、需要特别的仪器。HDL3沉淀法为通过含有2价金属离子和硫酸葡聚糖的试剂将HDL3以外聚集，通过离心来回收上清液部分的HDL3，并用自动分析装置进行测定的方法。仍然存在下述缺点：作业需要熟练、另外为用手的方法，有时需要检样的前处理操作，直至测定为止花费某种程度的时间，并非通用。另外，NMR法为通过磁共振来测定脂蛋白的颗粒数的方法，但是需要特殊的机械，并非一般性的方法。

需要说明的是，存在HDL亚级分的分析方法(专利文献2)。能够通过通用自动分析装置测定，但是采用通过使用表面活性剂来抑制HDL3以外的脂蛋白不受酶的作用的方法，HDL3反应中存在目的以外的脂蛋白，对测定产生影响、或者不能完全抑制的情况下有可能测定了HDL3以外的脂蛋白。

替代这样的方法、简便且可以选择性更好地对胆固醇量进行定量的试剂的发明成为必要。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2009-207463号公报

专利文献2：日本特开2001-346598号公报。

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的在于，提供无需繁杂的操作地定量被检试样中的HDL3的方法。

用于解决问题的方案

本申请发明人进行了深入研究，结果发现了与HDL3特异性地反应的表面活性剂。于是想到使被检试样与这种表面活性剂反应，定量胆固醇，由此能够定量被检试样中的HDL3胆固醇，并且实验性地确认该想法可行，从而完成了本发明。

即，本发明提供一种高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法，其包括使被检试样和与高密度脂蛋白3特异性地反应的表面活性剂反应，定量胆固醇，前述表面活性剂为选自由聚氧亚乙基多环苯基醚和聚氧亚乙基苯乙烯化苯基醚组成的组中的至少一种。

发明的效果