[发明专利]含水溶性有机溶剂的脱蜡缓冲液及其使用方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2012年1月23日提交的美国专利申请号13/356,491的优先权，其内容通过引用全文纳入本文。

背景

作为一种组织学研究中制备组织样品所用的包埋介质，石蜡已经被使用了很长时间。在一些情况下，塑料树脂也被用作包埋介质。这类包埋过程通常包括以下步骤：样品固定(如福尔马林固定)、脱水、清洗、石蜡浸润或浸渍、封闭或包埋在一块石蜡中，将石蜡块和样品切成薄片，将切片装载在玻片上、去除石蜡和用于该目的(即脱蜡或脱石蜡)的溶剂、以及在镜检前对切片进行染色。包埋介质的主要目的是使样品在天然状态下被切片和装载。石蜡包埋的优势在于可在染色前将蜡溶解使之与样品分离，从而使染色时切片为裸露组织的形式并且避免了与难以去除的基于树脂的包埋材料的存在相关的额外困难。

最近对于石蜡包埋组合物的改进拓宽了其实用性，同时保留了其与下游样品制备和分析的相容性。因此，对固定后石蜡包埋材料切片的脱蜡仍是一种广泛使用的方法，尤其是在免疫诊断目的的医院组织病理学实验室中。

一种通常使用的脱蜡方法涉及在有机溶剂中溶解包埋的石蜡。例如，目前通常在实验方案中使用二甲苯(一种可燃、有挥发性和毒性的有机溶剂)以溶解石蜡，实现对样品切片的脱蜡。通常，将装载在显微镜玻片上的样品浸入二甲苯浴中直至石蜡溶解。

另一种常用于脱蜡的方法涉及在含水性缓冲溶液的热浴中熔解并去除包埋的石蜡。使用热缓冲溶液的额外优势在于其可通过一种被称作热诱导表位修复(HIER)的过程进行抗原修复。HIER是一种常在免疫组化(IHC)或原位杂交(ISH)前使用的预处理过程，用于通过对装载在玻片上的样品材料中所含靶蛋白的分子构象进行热诱导修饰以改善染色。通常该修饰过程是必需的，因为虽然醛基固定剂(如福尔马林)能够很好地保存细胞形态，但它们也会引起蛋白交联，导致一些蛋白表位无法结合互补的抗体。HIER通常与酶消化联用，作为改善IHC/ISH染色反应中多种抗原反应性的方法。

现有的被设计用来在IHC/ISH前同时对玻片脱蜡并进行HIER的缓冲液配方利用了低浓度的表面活性剂和其他乳化剂以破碎石蜡。HIER步骤中玻片被置于高温(如70至100℃)下，使石蜡熔化且表面活性剂温和地将石蜡运送至缓冲液表面。然而，已知的缓冲液配方和方法的性能有限，有时会造成石蜡拖尾、玻片重新涂覆和不一致的染色结果。

相应地，需要能够在免疫组化或其他诊断分析前有效地去除样品中的石蜡或改良的石蜡基包埋材料的脱蜡组合物和方法，同时最小化对使用者的危险，与自动系统相容且保持与下游分析的相容性。需要不存在毒性或致癌性或毒性或致癌性有限、不产生或产生最少量的气味、能够降低有毒溶剂的使用量，使有毒废物最少和/或能够降低腐蚀性和可燃性的脱蜡组合物和方法。

发明内容

本发明公开了含水溶性有机溶剂的脱蜡缓冲液及其使用方法以及包含脱蜡缓冲液的试剂盒。本文所述脱蜡缓冲液可用于在高温下的水性缓冲溶液中快速并有效地去除装载在玻片上的组织切片中的包埋的石蜡，同时无需担心玻片上石蜡的再沉积。此外，本文所述脱蜡缓冲液可在单个步骤用于脱蜡和HIER，能够大幅减少实验方案的时间并降低样品损失或破坏的风险。

在一个实施方式中，一种脱蜡缓冲液包括缓冲剂、沸点高于80℃且在水中的溶解度至少为20体积百分比(vol％)的有机溶剂和水。所述脱蜡缓冲液的工作溶液可包括大于95vol％的水。在一个实施方式中，可使用浓缩脱蜡缓冲剂，通过用水稀释浓缩液以制备脱蜡缓冲液工作溶液。

在一个方面，所述脱蜡缓冲液能够在高温下在水性溶液中溶解熔解后的包埋石蜡且熔解后的石蜡在冷却后不会发生再固化。同样，所述脱蜡缓冲液能够降低石蜡的熔点，这可以大幅减少实验方案的时间。人们认为该活性是由于水溶性有机溶剂的作用。也就是说，由于溶剂化学性质的双重性，人们认为该溶剂能够在水性溶液中破坏氢键，并在水中溶解有机分子(如石蜡)。

通过以下描述和所附权利要求书或者通过学习下文中所述的本发明的实践，可以更充分地理解本发明的这些和其他目的及特征。

发明详述

I.引言