[发明专利]轮状病毒亚单位疫苗及其制备和使用的方法

说明书

发明领域

本申请要求2012年2月14日提交的美国临时专利申请系列No.USSN 61/598,624的优先权，将所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明总地来说涉及亚单位疫苗，具体地包含已被工程化以在遗传和抗原性上与由感染目标动物群体的病毒表达的肽几乎相同的轮状病毒肽的那些疫苗。通过毒素/解毒剂选择系统在细菌细胞群体中维持表达抗原性肽或亚单位蛋白的质粒。细菌细胞产生毒性蛋白，该毒性蛋白被由质粒编码的具有肽的解毒蛋白中和，从而使得非转化细胞不能存活。

背景

轮状病毒是婴儿和幼儿中严重腹泻的最常见原因(Dennehy PH,2000)，并且是引起通常称为肠胃感冒(stomach flu)(尽管与流感无关)的的感染的几种病毒之一。其属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)的双链RNA病毒属。该病毒有五个种，称为A、B、C、D和E(ICTV病毒分类学：2009发布)。表1提供了已知轮状病毒蛋白的概述。轮状病毒A(最常见的)引起超过90％的人的感染。该病毒通过粪口途径传播，感染和破坏沿着小肠排列的细胞，引起胃肠炎。除了其对人死亡的影响外，轮状病毒还感染动物，为家畜的病原体(Dubovi EJ,2010)。

例如，根据最近的研究，轮状病毒主要(65％)发现于来自具有腹泻的猪的粪便或肠内容物中。大部分动物被单个组(A,B,C)感染，超过一个轮状病毒组的合并感染确实也有发生(Yoon,KJ,Epidemiology of rotaviruses,ISUVDL submissions,2010-2011,Iowa State)。将近1/3的动物被至少组C轮状病毒感染。直至现在，猪的轮状病毒的预防牵涉相当神秘的实践，例如给健康猪喂饲感染的仔猪组织。该实践是必需的，因为组C轮状病毒不能体外生长，从而妨碍了常规灭活/减毒的全病毒疫苗的产生。因此，存在对更安全、更有效的预防性措施的明确、紧迫的需要。

表1.轮状病毒蛋白概述

可选择的方法可以是产生包含免疫原性轮状病毒亚单位蛋白或抗原的疫苗。在提交本申请时，本发明人了解到无描述产生轮状病毒亚单位疫苗(自体的或别的方式的)来免疫猪以抗轮状病毒(特别地组C种类)的方法的参考资料。下列专利和申请概述了相关轮状病毒现有技术，强调了基于亚单位的疫苗。

US7790178(属于Intervet)描述了包含灭活的犬轮状病毒的三价疫苗。

US7311918和US6589529(属于Children’s Hospital Ohio)描述了包含VP6蛋白片段、旨在用于接种人的重组轮状病毒融合蛋白。小鼠数据表明该疫苗产生针对VP6融合蛋白的免疫反应。

US6867353(属于Exploregen)总体上描述了使用转化的番茄进行的编码人轮状病毒结构蛋白的cDNA片段的表达。

US6716431(属于Wyeth,现Pfizer)描述了仍然保持抗原性但显示减小的细胞毒性的NSP4可选择形式(即导致氨基酸变化的SNP)。

US6673355和US6210682(属于Baylor College of Medicine)涉及NSP4及其片段(NSP4114-135、NSP4120-147、NSP4112-174或NSP4112-150)用于轮状病毒疾病预防和/或治疗的用途。还描述了包含肠毒素佐剂的组合物。US5891676和US5827696(也属于Baylor)分别描述了轮状病毒VP2和VP7的杆状病毒表达。

US6187319(属于University of Mass.)总地来说描述了通过施用第二轮状病毒的分离的VP6多肽产生动物的抗第一轮状病毒的免疫反应的方法，所述第二轮状病毒感染与待接种的动物不同的物种。

US5298244(属于University of Saskatchewan)描述了具有VP4、VP6和VP7的装配的病毒颗粒。

US20110171316(属于US Health and Human Service)描述了重组人轮状病毒组C病毒样颗粒。

US20100047763(属于Goes等人)描述了编码用于诊断试剂盒的轮状病毒蛋白的质粒DNA。