[发明专利]用于脑膜炎球菌中增加的蛋白表达的启动子

权利要求书

1.一种包含启动子的核酸，所述启动子包括

(i)来自脑膜炎球菌porA基因启动子的-10区域和

(ii)来自脑膜炎球菌porA基因启动子的-35区域，

其中所述-10区域和-35区域由12-20个核苷酸的间插序列隔开，并且其中所述间插序列不含聚-G序列或者包括具有不超过8个连续G核苷酸的聚-G序列。

2.一种包含与下游的蛋白编码基因可操作连接的启动子的核酸，其特征在于，所述启动子包括(i)来自脑膜炎球菌rRNA基因启动子的-10区域和/或(ii)来自脑膜炎球菌rRNA基因启动子的-35区域。

3.一种包含与蛋白编码基因可操作连接的启动子区域的核酸，所述启动子区域来自脑膜炎球菌rRNA基因启动子，所述蛋白编码基因具有5′UTR，所述5′UTR含有用于表达所述蛋白的翻译调节元件。

4.一种包含启动子的核酸，所述启动子包括来自脑膜炎球菌porA基因启动子的-10区域和来自脑膜炎球菌rRNA基因启动子的-35区域。

5.一种包含启动子的核酸，所述启动子包括SEQ ID NO：18，或SEQ ID NO：18的变体，所述变体与SEQ ID NO：18之间存在最多4个单核甘酸插入、删除或取代的差异。

6.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其特征在于

所述-10区域是TATAAT；

所述来自脑膜炎球菌porA基因启动子的-35区域是TGGTTT；和/或

所述来自脑膜炎球菌rRNA基因启动子的-35区域是TTGACA。

7.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其特征在于，所述在-35区域和-10区域之间的间插序列具有12-20个核苷酸，例如，SEQ ID NO：27或SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：29。

8.如权利要求7所述的核酸，其特征在于，所述间插序列不包括序列GGGGG。

9.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其特征在于，所述-10序列的非转录下游但是所述转录起始位点的上游具有5-10个核苷酸，例如，TGAAGAC或TCGCAAC。

10.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其特征在于，所述核酸包含SEQ ID NO：30。

11.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其特征在于，所述核酸包含SEQ ID NO：18或其变体，例如，SEQ ID NO：36的核苷酸6-39、SEQ ID NO：37的核苷酸6-38或SEQ ID NO：38的核苷酸6-39。

12.一种包含DNA序列的细菌表达载体，所述DNA序列包括前述权利要求中任一项中所述的启动子。

13.一种包含DNA序列的脑膜炎球菌，所述DNA序列包括前述权利要求中任一项中所述的启动子。

14.如权利要求13所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述启动子驱动外膜蛋白的表达。

15.如权利要求14所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述外膜蛋白是fHbp。

16.如权利要求13-15中任一项所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述细菌不表达活性MltA。

17.如权利要求13-16中任一项所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述细菌具有SynX和/或LpxL1的敲除。

18.如权利要求13-17中任一项所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述脑膜炎球菌是血清组B。

19.如权利要求13-17中任一项所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述脑膜炎球菌是血清组W135。

20.如权利要求13-19中任一项所述的脑膜炎球菌，其特征在于，所述脑膜炎球菌是免疫型L3。

21.从权利要求13-20中任一项所述的脑膜炎球菌制备的外膜囊泡。

22.一种免疫原性药物组合物，所述组合物包含权利要求21所述的囊泡。

23.如权利要求22所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括一种或多种来自脑膜炎球菌的偶联的荚膜糖。

24.一种在哺乳动物中引起免疫应答的方法，所述方法包含向所述哺乳动物给予权利要求22或23所述的组合物。