[发明专利]细胞回收方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用培养容器培养的细胞的回收方法，特别涉及用于提高细胞的回收效率的细胞回收方法。

背景技术

近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞和组织、微生物等。

对于这样的细胞的大量培养而言，一般使用培养容器培养细胞。在该使用培养容器的细胞培养中，需要在培养后从培养容器中回收细胞。

回收培养细胞(特别是浮游系细胞)时，以往实施的是从培养容器将细胞悬浮液全量回收，通过离心分离将细胞分离的方法。但是，在该方法中，在大量培养细胞而使细胞悬浮液大量存在的情况下，需要分成多次离心分离，存在浪费时间和工夫这样的问题点。

另一方面，作为与细胞回收方法相关联的技术，可以列举例如专利文献1中记载的细胞培养方法中采用的回收方法。该回收方法中，首先将使用后的培养基上清液从培养容器排出后，回收包含培养细胞的细胞悬浮液，由此可以获得浓缩的细胞悬浮液。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2007/052716号小册子

发明内容

发明要解决的课题

但是，该方法中存在残留于培养容器内而不能回收的细胞产生较多、回收效率不能说充分这样的问题。

即，根据该回收方法，可以回收浓缩的细胞悬浮液，但即使回收细胞悬浮液，也存在以附着于培养容器内的壁面等的状态残留的细胞。另外，在培养容器由可挠性材料构成的情况下，若细胞悬浮液变为少量则培养容器内容易堵塞，较多量的细胞悬浮液残留于培养容器的结果是，还存在细胞在培养容器内残留这样的问题。

为了解决这样的问题，也考虑了在回收细胞悬浮液后，在培养容器中加入新的洗涤液(生理盐水、磷酸缓冲液)并搅拌，使培养容器内残留的细胞在洗涤液中悬浮，进行再次回收这样的方法。但是，像这样使用洗涤液回收培养容器内残留的细胞的方法中，需要新的洗涤液、用于保存该洗涤液的洗涤液保存容器，存在花费多余的成本这样的问题。

本发明鉴于上述问题而完成，目的在于提供在回收使用培养容器培养的细胞时，可以抑制培养容器的堵塞，不使用新的洗涤用的培养液、洗涤液，而提高细胞的回收效率的细胞回收方法。

用于解决课题的手段

为了达成上述目的，本发明的细胞回收方法是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法的特征在于，包括以下工序：上清液排出工序，将培养后的培养上清液从培养容器转移至废液容器；细胞回收工序，将浓缩的细胞悬浮液从培养容器转移至细胞回收容器；上清液返回工序，使排出到废液容器的培养上清液的一部分返回培养容器，使残留于培养容器的细胞悬浮于细胞悬浮液；以及再回收工序，将悬浮有残留细胞的细胞悬浮液从培养容器再次转移至细胞回收容器。

另外，本发明的细胞回收方法是使用细胞培养用试剂盒培养的细胞的回收方法，该试剂盒通过由导管至少连接用于培养细胞的培养容器、回收培养后的细胞的细胞回收容器、和回收培养后的培养基的废液容器而成，所述回收方法包括以下工序：上清液排出工序，将培养后的培养上清液从培养容器转移至废液容器；缩小工序，使培养容器的底面积缩小，将浓缩的细胞悬浮液汇集到培养容器的细胞回收接口侧；以及缩小回收工序，将汇集的细胞悬浮液从培养容器转移至细胞回收容器。

发明效果

根据本发明，在回收使用培养容器培养的细胞时，可以抑制培养容器的堵塞，不使用新的洗涤用培养液、洗涤液，而提高细胞的回收效率。

附图说明

图1是表示在本发明的实施方式的细胞回收方法中使用的细胞培养用试剂盒的图。

图2是表示本发明的第一实施方式的细胞回收方法中的洗涤回收顺序的图。

图3是表示本发明的第二实施方式的细胞回收方法中的静置顺序的图。

图4是表示本发明的第三实施方式的细胞回收方法中的缩小回收顺序的图。

图5是表示利用本发明的实施方式的细胞回收方法的实验结果的图。

具体实施方式

以下，参照附图对本发明的细胞回收方法的优选实施方式进行说明。首先，参照图1对本实施方式的细胞回收方法中可以优选使用的细胞培养用试剂盒进行说明。该细胞培养用试剂盒中，具备培养容器10、培养基储藏容器20、细胞注入容器30、细胞回收容器40、取样容器50、及管60。另外，培养基储藏容器20也作为废液容器使用。