[发明专利]HIV检测用寡核苷酸、HIV检测试剂盒及HIV检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus；以下称为HIV)检测用寡核苷酸、HIV检测试剂盒及HIV检测方法。

本申请基于2012年1月25日在日本提出的日本特愿2012-013087号要求优先权，将其内容援引到本说明书中。

背景技术

对于作为获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immune Deficiency Syndrome；以下称为艾滋病)的原因的HIV感染，重要的是确立对HIV感染进行根本性的预防、并且在产生万一已经感染的怀疑时能够早期诊断感染的有无的技术。

另外，即使通过治疗使HIV看起来从体内消失，在诊断技术的病毒检测灵敏度低的情况下，尽管HIV还潜伏在体内，也可能会被误诊为HIV已经从体内“消失”，从而残留艾滋病复发的祸根。

在HIV感染后的急性感染期，HIV侵入宿主细胞内，对自身的病毒RNA进行逆转录而合成DNA，并将该DNA插入到宿主细胞的DNA中而形成前病毒。在宿主细胞内，该前病毒表达病毒基因，通过自身的病毒蛋白质对病毒RNA进行包装而形成病毒颗粒，该病毒颗粒输出到宿主细胞外。

目前，作为临床上的抗HIV治疗方法，通常为多剂联合疗法(Highly Active Anti-Retroviral Therapy；以下称为HAART疗法)。HAART疗法是施用对上述急性感染期中的病毒RNA的逆转录、病毒DNA向基因组DNA中的插入等进行抑制的多种抑制剂的方法。通过HAART疗法，抗HIV治疗实现了显著的发展。

另一方面，在利用HAART疗法的治疗过程中，一部分感染细胞获得了针对HAART疗法的耐药性(以下，将该感染细胞称为潜伏感染细胞)。潜伏感染细胞中虽然具有前病毒，但是在急性感染期中观察到的病毒的生命周期休止，不产生病毒RNA。由于HAART疗法如上所述是对病毒增殖的各步骤进行抑制的疗法，因此通过HAART疗法难以将病毒从潜伏感染细胞中除去。但是，如果中断HAART疗法，则潜伏感染细胞中的病毒的生命周期会重新启动。

因此，如果不能将病毒从潜伏感染细胞中除去，则会对HIV患者的QOL(Quality of Life，生活质量)产生不利影响。

对此，本发明人构建了模型细胞系，使用该模型细胞系分析了潜伏感染细胞的表型，结果发现，潜伏感染细胞生产出约60个碱基的短链RNA(参照非专利文献1)。

在HIV感染的诊断方法中，对感染者的血液中的病毒量进行定量作为掌握病情程度、治愈经过的指标是很重要的。

目前，以实时PCR法作为靶核酸的扩增、检测原理的HIV的RNA定量法已知为HIV感染的快速诊断方法之一。

作为使用实时PCR法的HIV的RNA定量法，可以列举例如专利文献1记载的方法。专利文献1记载的方法是使用以能够识别HIV-1的各种亚型的方式设计的简并引物对插入到基因组中的HIV-1前病毒进行扩增、定量的方法。该方法的优点在于不仅能够应对作为日本人感染者的主要感染源的亚型B，而且该能够应对除此以外的各种亚型。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2007-295896号公报

非专利文献

非专利文献1：水谷等、J Virol.、第83卷、第11569～11580页、2009年

发明内容

发明所要解决的问题

但是，由于HIV具有保真性(准确性)低的逆转录酶，因此是非常容易突变的病毒。专利文献1记载的识别HIV的寡核苷酸的序列来源于位于转录起始点下游约500个碱基处的编码结构蛋白GAG的gag基因区，使用该序列对于高精度地检测突变的所有病毒来说是不充分的。

另外，在感染细胞中，从感染暴露日(感染暴露日)起到能够定量地检测到包含GAG区域的转录延伸后的病毒RNA，需要与病毒的增殖相伴随的12天这样的天数。因此，期望能够更早期地以高灵敏度检测病毒的技术。

而且，即使使用专利文献1记载的寡核苷酸，也不能检测出上述的潜伏感染细胞所产生的短链RNA，因而尚有改善的余地。

本发明是鉴于上述情况而进行的，其课题在于提供能够高精度且高灵敏度地早期检测HIV的HIV检测用寡核苷酸、HIV检测试剂盒及HIV检测方法。

用于解决问题的手段