[发明专利]表达载体和蛋白质的制造方法

权利要求书

1.表达载体，其特征在于，具有表达盒，该表达盒包含编码下述蛋白质(Y)的结构基因序列(y)、位于所述结构基因序列(y)的下游的编码作为要取得的蛋白质的蛋白质(Z)的结构基因序列(z)、用于表达包括所述蛋白质(Y)部分和所述蛋白质(Z)部分的融合蛋白的启动子序列和终止子序列，

所述蛋白质(Y)为PDI1的部分蛋白质或它们的突变蛋白质；所述PDI1是指蛋白质二硫键异构酶，即Protein disulfide isomerase 1，

所述蛋白质(Y)具有PDI1的内质网转移信号，

所述蛋白质(Y)为由内质网转移信号、a结构域、b结构域、x结构域构成的部分蛋白质，由内质网转移信号、a结构域、b结构域、b’结构域、x结构域构成的部分蛋白质，或它们中的任一个的部分蛋白质的突变蛋白质，

所述突变蛋白质是将分子伴侣活性的活性中心CGHC中的半胱氨酸残基C置换为丝氨酸残基S的突变蛋白质。

2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述PDI1为酵母的PDI1、来源于丝状菌的PDI1或来源于人的PDI1。

3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述PDI1为来源于裂殖酵母属的粟酒裂殖酵母的PDI1或来源于人的PDI1；所述粟酒裂殖酵母即Schizosaccharomyces pombe。

4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，在所述结构基因序列(y)与所述结构基因序列(z)之间具有编码由氨基酸或肽形成的剪切位点(W)的结构基因序列(w)，该剪切位点(W)作为在细胞内或细胞外于所述蛋白质(Z)部分的N末端侧被剪切的位点起作用。

5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述剪切位点(W)为在细胞内于所述融合蛋白的蛋白质(Z)部分的N末端侧被剪切的位点。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述剪切位点(W)为KR，或与所述蛋白质(Z)部分结合的C末端侧为KR的氨基酸数3以上的肽；其中，K表示赖氨酸，R表示精氨酸。

7.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述剪切位点(W)为被可在所述融合蛋白的蛋白质(Z)部分的N末端侧进行剪切的蛋白酶识别的位点。

8.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述蛋白质(Y)至少包括内质网转移信号、a结构域、b结构域。

9.转化体的制造方法，其特征在于，将权利要求1～8中的任一项所述的表达载体导入宿主细胞中。

10.转化体，其特征在于，具有权利要求1～8中的任一项所述的表达载体作为染色体外基因。

11.转化体，其特征在于，在染色体中具有权利要求1～8中的任一项所述的表达载体中的表达盒。

12.蛋白质的制造方法，其特征在于，培养权利要求10或11所述的转化体，从所得的培养液取得所述融合蛋白或所述蛋白质(Z)。

13.蛋白质的制造方法，其特征在于，对在染色体中具有权利要求7所述的表达载体中的表达盒或者具有权利要求7所述的表达载体作为染色体外基因的转化体进行培养，从所得的培养液取得所述融合蛋白，再通过蛋白酶在该融合蛋白的蛋白质(Z)部分的N末端侧剪切而制造所述蛋白质(Z)。

14.克隆载体，其特征在于，具有可在宿主细胞内起作用的启动子序列、位于该启动子序列的下游且受该启动子控制的编码下述蛋白质(Y)的结构基因序列(y)、位于该结构基因序列(y)的下游且用于导入结构基因的克隆位点、和可在该宿主细胞内起作用的终止子序列，

所述蛋白质(Y)为PDI1的部分蛋白质或它们的突变蛋白质，

所述蛋白质(Y)具有PDI1的内质网转移信号，

所述蛋白质(Y)为由内质网转移信号、a结构域、b结构域、x结构域构成的部分蛋白质，由内质网转移信号、a结构域、b结构域、b’结构域、x结构域构成的部分蛋白质，或它们中的任一个的部分蛋白质的突变蛋白质，

所述突变蛋白质是将分子伴侣活性的活性中心CGHC中的半胱氨酸残基C置换为丝氨酸残基S的突变蛋白质。