[实用新型]一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，特别是涉及一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条。

背景技术

酪蛋白是指乳中一大类蛋白质的总称，占乳蛋白的76-86%。酪蛋白不是单一的蛋白质，而是由α-、β-、γ-、κ-四种类型构成，它们各自都有相对分子质量和等电点不同的变异体。其中α-酪蛋白约占75%，β-酪蛋白约占22%，γ-酪蛋白约占3%，κ-酪蛋白只占微量。

目前，国内尚未有酪蛋白含量检测方法的国家标准和行业标准。申请号为200810007526.7《一种牛乳中酪蛋白含量的检测方法》的中国专利申请公开的一种酪蛋白含量的检测方法是向牛乳中加入酪蛋白沉淀剂，过滤去除牛乳中酪蛋白，通过测定去除酪蛋白前后的蛋白含量之差计算牛乳中酪蛋白含量，该方法操作复杂，不适合现场操作；申请号为200810146950.X《一种乳中β-酪蛋白含量的检测方法》的中国专利申请公开了一种利用毛细管电泳检测乳中酪蛋白含量的方法，该方法需要对乳样品进行处理，该方法的最低检出线为0.15ng，最低检出浓度为0.005mg/mL，精确度达90%以上，该方法需要预处理，且需特殊仪器设备，不适合现场操作；申请号为200910068653.2《αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白特异性抗体及试剂盒和试纸条》的中国专利申请公开了αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白血清抗体及试剂盒和试纸条的制备方法，该方法所针对的酪蛋白特异性较差，检验结果有效性较低。

实用新型内容

鉴于上述缺陷，本实用新型的主要目的是提供一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，以实现对原料乳中是否掺假及酪蛋白含量是否达标的快速检测。

β-酪蛋白是原料奶中较为稳定的成分，也是乳的特征蛋白，所以其含量是否合格，不仅可以判断乳品蛋白含量和质量，而且可以有效避免用含氮化合物、其他非乳蛋白冒充如蛋白的掺杂使假。

为了达到以上目的，本实用新型提供的该种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，该试纸条含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，其中：所述金标结合垫为吸附β-酪蛋白金标抗体的结合垫，所述纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，分别是含β-酪蛋白的检测带和羊抗鼠抗体的质控带。

本实用新型提供的该种β-酪蛋白胶体金检测试纸条是多层结构的窄条薄片，具体结构是：底层是衬板，衬板中部叠置粘贴纤维素膜，衬板一端部上叠置粘贴吸水垫，衬板另一端部上叠置粘贴样品垫，吸水垫内端与样品垫内端各自分别与纤维素膜一端搭接，在样品垫与纤维素膜的搭接处，两者之间夹置粘贴一段金标结合垫。

进一步的，所述的衬板为不吸水的韧性材料；

更进一步的，上述韧性材料用硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成。

进一步的，所述的样品垫为玻璃纤维膜、尼龙膜、娶偏二氟乙烯膜或聚酯膜任意一种。

进一步的，所述的结合垫为玻璃纤维膜、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜任意一种。

进一步的，所述的纤维素膜为硝酸纤维素膜或羧化纤维素膜。

进一步的，所述的吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸。

上述试纸条中所涉及的β-酪蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

1.动物免疫注射：将β-酪蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠，进行免疫以及加强免疫；

2.制备杂交瘤细胞：取免疫效果最佳的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，以β-酪蛋白、αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白作为检测抗原，通过酶联免疫吸附试验检测杂交瘤细胞的上清进行筛选，保留阳性孔，经过亚克隆获得能稳定分泌抗β-酪蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株后；

3.对小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，采集腹水以及对腹水纯化获得β-酪蛋白单克隆抗体。

所述步骤1中各次的免疫注射剂量是50-100μg/只；

所述步骤2中，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按2-10:1的比例进行细胞融合。

上述β-酪蛋白胶体金检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1.胶体金颗粒的制备；

2.胶体金标记β-酪蛋白单克隆抗体，并将标记后的β-酪蛋白金标抗体吸附于金标结合垫上；

3.将β-酪蛋白和羊抗鼠抗体分别吸附于硝酸纤维素膜检测和质控线位置上；

4.组装胶体金试纸条，将吸水垫、纤维素膜、金标结合垫和样品垫从上到下依次固定于衬板上，即成β-酪蛋白胶体金检测试纸条。

本实用新型所提供的β-酪蛋白胶体金检测试纸条，其应用方法包括以下步骤：

1、样品处理