[实用新型]用于检测NK细胞活性的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫学技术领域，涉及一种用于检测NK细胞活性的试剂盒。

背景技术

人的免疫系统中，T淋巴细胞担负着免疫的主要功能，细胞毒性T淋巴细胞是一种特异的T淋巴细胞，它在抵御肿瘤形成、病毒疾病感染过程中发挥着重要的作用。细胞毒性T淋巴细胞在发挥杀伤作用时，T细胞受体要识别抗原提呈细胞或者靶细胞上的MHC分子所提成的抗原肽，在这个过程中，T细胞受体不仅需要识别抗原肽，还需要识别与抗原肽结合的MHC分子类型，此现象即MHC限制。但是，多数的肿瘤细胞以及部分病毒感染细胞为了逃逸机体的免疫监视，其细胞表面的MHC分子表达通常都明显下调甚至消失（被称为“缺失自己”），这时T淋巴细胞就无法发挥作用。

20世纪70年代初学者在研究T细胞对靶细胞特异性杀伤时发现了NK细胞（自然杀伤细胞），NK细胞的主要活性也是杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞，但它介导天然免疫应答，不依赖抗体和补体，就能立即杀灭肿瘤细胞和病毒感染细胞。NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一，检测NK细胞活性可以协助一些疾病的诊断，监测患者的免疫状态。

目前检测NK细胞活性的方法主要有：

一、LDH释放法：活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物，在酶标仪上用490nm比色测定；

二、MTT还原法：本法根据细胞代谢活动与活细胞数直接成比例的原理，通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细胞的死亡。氧化型MTT进入细胞后被线粒体脱氢酶还原生成蓝色formazan颗粒，经溶剂溶解后比色定量，其颜色深浅直接与活细胞数有关，与靶细胞对照孔比较可计算效应细胞杀伤靶细胞的百分比；

三、同位素释放法：将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时，靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来，其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性；

四、流式细胞术：将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞,将EGFP-K562细胞与人外周血单个核细胞按10∶1的比例混合孵育2小时后,用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率。

以上几种方法均涉及细胞培养，程序复杂、操作时间长，不能在第一时间提供临床所需资料，并且同位素释放法涉及放射性物质的使用，实验条件苛刻，大多数实验室无法常规开展。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测NK细胞活性的试剂盒，可以快速、准确地检测活化的NK细胞数量，从而对NK细胞活性进行评估。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种用于检测NK细胞活性的试剂盒，包括盒体（1）、盒盖（2）和设置在盒体（1）内的衬垫（3），所述衬垫（3）上设有小孔，装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管（4）、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管（5）、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管（6）、装有荧光标记HLA-DR单克隆抗体的试剂管（7）、装有荧光标记CD45单克隆抗体的试剂管（8）、装有红细胞裂解液的试剂管（9）和装有PBS缓冲液的试剂管（10）被设置在所述小孔内。

其中，每个单克隆抗体的荧光标记不同；优选地，CD69单克隆抗体使用FITC标记，CD56单克隆抗体使用PE标记，CD3单克隆抗体使用APC标记，CD45单克隆抗体使用PerCP标记。

其中，所述红细胞裂解液和PBS缓冲液为本领域常规试剂。

其中，所述衬垫（3）上设有7个小孔，所述小孔在所述衬垫（3）上分成两排平行排列。

通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下：

（1）本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。

（2）本实用新型的试剂盒在检测NK细胞活性时，不涉及细胞培养，程序简单，降低了检测工作的强度；对实验室条件要求不高，只要有流式细胞仪的实验室即可开展检测，便于技术广泛推广，检测操作时间短、检测精度高，上机操作和数据分析方法简单，可以在第一时间得到临床所需资料。

附图说明