[实用新型]一种基于蛋白A/G微粒的免疫沉淀试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种从细胞或组织裂解物中富集纯化特定蛋白的试剂盒。 

背景技术

免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP)是以抗原抗体特异性结合反应为基础，通过特异性抗体以及蛋白A/G微粒从细胞或组织裂解物中富集纯化靶蛋白的研究方法，以免疫沉淀为基础，该技术广泛用于研究蛋白质与蛋白质的相互作用（CoIP）、蛋白质与DNA的相互作用（ChIP）以及蛋白质与RNA的相互作用（RIP）。 

免疫沉淀涉及实验主要包括抗体与细胞或组织裂解物的孵育、蛋白A/G微粒的沉淀、非特异性蛋白的洗涤去除以及靶蛋白的洗脱。目前传统的实验操作获得靶蛋白样品体积较大，需要经过浓缩才能进行后续Western blotting检测，而且靶蛋白检测结果常常受到沉淀抗体重链与轻链信号的影响，同时，免疫沉淀实验涉及试剂较多、实验流程较长，研究者不能快速高效完成实验，给研究造成了很大的不便。该试剂盒包含免疫沉淀涉及所有试剂，纯化柱的使用简化了实验操作，同时提高了靶蛋白的产量，且靶蛋白样品不需要浓缩可以直接进行Western blotting检测，同时Western blotting检测中以ProteinA-HRP替代普通二抗能够消除沉淀抗体重链轻链信号对靶蛋白的影响。目前市场上尚无此类试剂盒。 

实用新型内容

本实用新型所解决的问题是提供一种高效实用的免疫沉淀实验试剂盒，其操作方便快捷，获得靶蛋白产量大，以及在后续Western blotting中背景低、无沉淀抗体信号的干扰，实验结果稳定性好，减少了实验所用时间。 

本实用新型的技术方案是：一种常规实验用免疫沉淀试剂盒，包括盒体和固定于泡沫塑料模具上的3瓶缓冲液与6管试剂以及放于自封袋中的20套纯化柱，一份说明书，3瓶缓冲液与6管试剂分别为1瓶细胞或组织裂解液、1瓶孵育缓冲液、1瓶20倍洗涤缓冲液，1管蛋白A/G微粒匀浆、1管洗脱液、1管碱中和液、1管5倍浓缩蛋白上样缓冲液、1管Protein A-HRP二抗，1管100mM蛋白酶抑制剂。其特征在于：孵育缓冲液可以有效促进抗原抗体的结合反应；纯化柱可以 使整个实验操作在柱芯内完成，有利于洗涤去除杂蛋白，提高了靶蛋白的产量，降低了非特异性蛋白的影响；Protein A-HRP二抗可以消除Western blotting检测中沉淀抗体重链与轻链对靶蛋白信号的影响。 

该基于蛋白A/G微粒进行免疫沉淀试剂盒，另附操作手册。每个试剂盒的试剂足够进行20次免疫沉淀实验，检测时将细胞或组织裂解物与抗体以及蛋白A/G微粒孵育并经过对非特异性蛋白的洗涤，最终洗脱获得靶蛋白，通过Western blotting检测，操作简单，可快速完成实验。 

本实用新型的有益效果：能够简便、高效完成免疫沉淀实验，后续Western blotting检测非特异蛋白信号干扰少。 

附图说明：

图1为本实用新型试剂瓶（管）纵剖面平面图； 

图2为本实用新型纯化柱（10）的纵剖面平面图，此纯化柱由1ml柱芯（a）、2ml收集管（b）以及柱芯末端封口帽（c）组成； 

图3为本实用新型泡沫塑料模具（11）俯视图； 

图4为本实用新型盒体（12）与固定泡沫塑料模具（11）侧视图。参见附图：盒体（12）为长方体硬纸盒，固定试剂瓶与试剂管的是泡沫塑料模具（11）；细胞或组织裂解液（1）是30ml黑色PE塑料瓶，孵育缓冲液（2）是30ml白色PE塑料瓶，20倍洗涤缓冲液（3）是30ml白色PE塑料瓶，蛋白A/G微粒匀浆（4）是蓝色帽子的2ml塑料管，洗脱液（5）是白色帽子的5ml塑料管，碱中和液（6）是黄色帽子的0.5ml塑料管，5倍浓缩蛋白上样缓冲液（7）是绿色帽子的2ml塑料管，Protein A-HRP二抗（8）是红色帽子的0.5ml塑料管，100mM蛋白酶抑制剂（9）是白色帽子的5ml塑料管，由1ml柱芯（a）、2ml收集管(b)以及柱芯末端封口帽(c)组成的纯化柱（10）放于自封袋中。泡沫塑料模具（11）有9个下凹瓶位和管位以及一个纯化柱放置区域，放置位置依次是：30ml细胞或组织裂解液在瓶位（1），20ml孵育缓冲液在瓶位（2），15ml20倍洗涤缓冲液在瓶位（3），1ml蛋白A/G微粒匀浆在瓶位（4），2.5ml洗脱液在瓶位（5），250ul碱中和液在瓶位（6），800ul5倍浓缩蛋白上样缓冲液在瓶位（7），200ul Protein A-HRP二抗在瓶位（8），2ml100mM蛋白酶抑制剂在瓶位（9），20套纯化柱在区域（10）。 

具体实施方式