[实用新型]猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的ELISA检测试剂盒

说明书

本实用新型属于兽类疫病检测技术领域，具体涉及一种能同时对猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体进行批量检测的ELISA检测试剂盒，可用于动物疫病流行病的检测与调查。

猪瘟、猪蓝耳病和猪伪狂犬病都是流行于兽类中的烈性传染病，严重威胁畜牧业的正常发展，养殖场的兽类一旦感染这些病毒，将造成严重的经济损失。

猪瘟（classical swine fever，CSF）是对养猪业危害最为严重的疫病之一。在危害级别上，它是我国一类动物疫病，OIE法定报告的动物疫病。猪瘟是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、发热、接触性传染传染病，具有高度传染性和致死性。1885年首先在美国发现，以后传播到世界各大洲，中国大部分省都有发生。其主要通过直接接触，或由于接触污染的媒介物而发病，消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮肤均是感染途径。

猪蓝耳病是由猪蓝耳病病毒引起以妊娠母猪繁殖障碍及各种年龄猪，特别是仔猪的呼吸道疾病为特征的一种严重的传染性疫病，PRRS现已遍布于全世界主要养猪国家和地区，已经成为威胁养猪业健康发展的主要疫病之一。

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种猪类传染性病。猪发生伪狂犬病后，其临诊症状因日龄而异，成年猪一般呈隐性感染，怀孕母猪可导致流产、死胎、木乃伊胎和种猪不育等综合症侯群。15日龄以内的仔猪发病死亡率可达100%，断奶仔猪发病率可达40%，死亡率20%左右。伪狂犬病的发生具有一定的季节性，多发生在寒冷的季节，但其他季节也有发生。

由此可见，猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒和伪狂犬病毒的侵入会对畜牧业造成严重的危害，这也间接导致了肉类市场供求关系混乱、肉类产品出口受阻、政府财政负担加重和公众恐慌，因此，使用猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病的相关疫苗进行免疫注射，并对免疫效果进行在线监测以确定其是否产生相应的抗体保护水平具有非常重大的意义。

本实用新型目的在于提供一种同时、批量、有效地检测猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的ELISA检测试剂盒。

为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：

一种猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的ELISA检测试剂盒，该试剂盒有一个盒体，其中，所述盒体内设有抗原包被反应板、猪瘟抗体阳性对照血清、猪蓝耳病抗体阳性对照血清、猪伪狂犬病抗体阳性对照血清、猪瘟抗体阴性对照血清、猪蓝耳病抗体阴性对照血清、猪伪狂犬病抗体阴性对照血清、20×浓缩洗涤液、样品稀释液、酶标结合物、显色剂A、显色剂B和终止液。

具体的，所述抗原包被反应板的规格为96孔（96T），从左至右被均分为检测区I、检测区II和检测区III三个区域，每个区域有32T；所述检测区I包被猪瘟病毒蛋白抗原，检测区II包被猪蓝耳病病毒蛋白抗原，检测区III包被猪伪狂犬病病毒蛋白抗原。

具体的，所述抗原包被反应板的规格为96孔（96T），从左至右被均分为检测区I、检测区II和检测区III三个区域，每个区域有32T；所述检测区I包被猪瘟病毒蛋白抗原，检测区II包被猪蓝耳病病毒蛋白抗原，检测区III包被猪伪狂犬病病毒蛋白抗原。

所述的酶标结合物为酶标记的抗猪IgG。

上述的猪瘟病毒蛋白抗原、猪蓝耳病病毒蛋白抗原和猪伪狂犬病病毒蛋白抗原均为高纯度的原核表达蛋白，可按照本领域常规技术制备或购买市售产品均可。盒体内可分为抗原包被反应板和试剂反应体系两部分；抗原包被反应板可以用PS材质的酶标板制成，试剂反应体系的包装瓶可以是聚丙烯瓶。

本实用新型采用酶联免疫间接法，将猪瘟病毒蛋白抗原、猪蓝耳病病毒蛋白抗原、猪伪狂犬病病毒蛋白抗原分别包被到包被反应板的三个检测区域内，所包抗原可分别与待检样品中的特异性抗体反应，形成抗原‑抗体复合物被吸附到固相包被反应板上，再加入酶标结合物（酶标记的抗猪IgG），形成固相病毒抗原‑病毒抗体‑抗猪抗体‑HRP免疫复合物。如果待检样品中含有相应的抗体，加入显色剂后即为酶催化显色，为阳性，反之为阴性。

本实用新型所述试剂盒通过对包被反应板的抗原包被浓度和酶标记结合物浓度的调整，使其能够产生特异性显色，从而进行猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的检测。该试剂盒能同时对猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体进行批量检测，具有灵敏度高、特异性好、快速检测大批量样品等优点，可用于动物疫病流行病的检测与调查。