[实用新型]一种弯曲菌多重PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及分子生物学检测领域，具体地说，本实用新型涉及一种弯曲菌多重PCR检测试剂盒。 

背景技术

弯曲菌(Campylobacter spp)是一种重要的人兽共患病原菌，常引起动物腹泻、流产、禽类肝炎和蓝冠病，还可引起人类急性肠炎、格林巴利综合征、反应性关节炎、Reiter’s综合征等多种痰病，人类常因摄入被弯曲菌污染的食物和饮水而感染。研究表明，该菌少至500个也可致病，但很少发生死亡，死亡率为千分之一。最易感人群是5岁以下儿童和15-29岁的青年。该菌广泛存在于鸟、禽、猫、狗等动物体内，已涉及生的和未煮熟的鸡、生的和巴氏杀菌不彻底的牛奶、蛋制品、生火腿、未经氯处理的水。弯曲菌传统的鉴定方法主要是生化鉴定和血清学方法，操作繁琐，检测周期长。因此，建立快速、准确的检测方法对控制弯曲菌尤为重要且非常迫切。目前市售的弯曲菌检测试剂盒，检测致病菌种类少，并且多种PCR体系中无弯曲菌23S rRNA通用引物，在判断阴性菌时，无法推测是否为模版DNA加入量不够。 

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种弯曲菌多重PCR检测试剂盒。 

为了实现本实用新型的目的，本实用新型提供一种弯曲菌多重PCR检测试剂盒，包括：盒盖、盒体、能够嵌入所述盒体的装有酶反应混合物的容器、能够嵌入所述盒体的装有引物混合物的容器、能够嵌入所述盒体的装有阳性对照的容器、和能够嵌入所述盒体的装有水 的容器。 

如本文中使用的，术语“能够嵌入盒体”是指根据需要容器可以自由地插入盒体和从盒体中取出。 

优选地，所述容器是1.5mL离心管。该规格的试管可以大规模便捷地应用于分子生物学检测领域。 

优选地，所述水是无菌去离子水。 

优选地，本实用新型的试剂盒还包括设置在所述盒体上的两个孔洞。根据需要，所述两个孔洞可以不装有容器，在需要时，两个孔洞中也可以装有需要使用的容器，该容器中装有需要的试剂，这样就极大地方便了用户的使用。 

优选地，所述装有引物混合物的容器装有检测空肠弯曲菌的引物、检测结肠弯曲菌的引物、检测海鸥弯曲菌的引物、检测乌普萨拉弯曲菌的引物、检测胎儿弯曲菌胚胎亚种的引物和弯曲菌属23SrRNA通用引物。 

更优选地，检测空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）的引物（以下简称CJ）为： 

上游引物：5’-ACTTCTTTATTGCTTGCTGC-3’ 

下游引物：5’-GCCACAACAAGTAAAGAAGC-3’。 

更优选地，检测结肠弯曲菌（C.coli）的引物（以下简称CC）为： 

上游引物：5’-GTAAAACCAAAGCTTATCGTG-3’ 

下游引物：5’-TCCAGCAATGTGTGCAATG-3’。 

更优选地，检测海鸥弯曲菌（C.lari）的引物（以下简称CL）为： 

上游引物：5’-TAGAGAGATAGCAAAAGAGA-3’ 

下游引物：5’-TACACATAATAATCCCACCC-3’。 

更优选地，检测乌普萨拉弯曲菌（C.upsaliensis）的引物（以下简称CU）为： 

上游引物：5’-AATTGAAACTCTTGCTATCC-3’ 

下游引物：5’-TCATACATTTTACCCGAGCT-3’。 

更优选地，检测胎儿弯曲菌胚胎亚种（C.fetus subsp.fetus）的引物（以下简称CF）为： 

上游引物：5’-GCAAATATAAATGTAAGCGGAGAG-3’ 

下游引物：5’-TGCAGCGGCCCCACCTAT-3’。 

更优选地，弯曲菌属23S rRNA通用引物（以下简称23S rRNA）为： 

上游引物：5’-TATACCGGTAAGGAGTGCTGGAG-3’ 

上游引物：5’-ATCAATTAACCTTCGAGCACCG-3’。 

本实用新型所述的试剂盒优点在于：1、多重PCR方法操作简单快速，能同时检测5种常见致病弯曲菌；2、本试剂盒中的阳性对照包含待测五种菌的DNA模版，能监控多重体系中每对引物的工作情况；多重PCR体系中加入弯曲菌23S rRNA通用引物，能直接反应每个PCR体系中是否加入了细菌DNA模版，防止出现由于模版加入量不够出现的假阴性。 

附图说明